黄连素对动脉粥样硬化中巨噬细胞自噬功能调控机制的研究

发布时间：2020-05-08 19:33

【摘要】：目的:用ox LDL处理后含大量脂质的小鼠巨噬细胞为泡沫细胞,视为动脉粥样硬化形成过程,检测促动脉粥样硬化环境下巨噬细胞自噬功能的变化,以及黄连素对其调节作用及其分子机制。方法:培养小鼠巨噬细胞J774A.1,构建泡沫细胞模型,将细胞随机分为5组,分别是正常对照组,25ng/μl氧化低密度脂蛋白(ox LDL)组,50ng/μl ox LDL组,75ng/μl ox LDL组,100ng/μlox LDL组:分别用油红O检测细胞脂质含量,用CD36作为巨噬细胞脂质代谢的标志蛋白,收集蛋白,Westren-blot检测CD36的变化。为研究黄连素对巨噬细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LAMP、P53、Bcl-2的m RNA表达的影响,将细胞随机分为5组,正常对照组,6.25μM黄连素(BBR)组,12.5μM BBR组,25μM BBR组,50μM BBR组,分别提取总RNA,逆转录成c DNA,Real Time PCR检测自噬相关蛋白Beclin-1、LAMP、P53、Bcl-2的m RNA表达的变化。更深一步研究BBR对泡沫细胞脂质累积以及自噬功能的影响,将细胞随机分为4组,正常对照组,75 ng/μlox LDL组,75 ng/μlox LDL+25μMBBR组,75 ng/μlox LDL+25μM BBR+氯喹30μM(CQ)组,收集蛋白,Westren-blot检测自噬标志蛋白P62,LC3的变化,以及CD36的变化。结果:1.油红O染色结果显示,在50 ng/μl、75 ng/μl、100 ng/μl ox LD浓度下脂质含量超过细胞体积的50%,Westren-blot结果显示,CD36在ox LDL浓度为25 ng/μl,50 ng/μl,75 ng/μl明显升高,在100 ng/μl浓度下升高不明显。表明泡沫细胞造模成功。2.Beclin-1的m RNA表达水平在BBR25μM的浓度下增加最明显,LAMP在12.5μM、25μM明显增加,BBR12.5μM的浓度下增加最明显,P53的m RNA表达水平在BBR25μM明显增加,Bcl-2的m RNA表达水平在BBR6.25μM、12.5μM、25μM、50μM均明显增加。3.加入BBR后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ稍有增加,P62稍有减少,加入BBR后CD36减少。结论:BBR可以增强巨噬细胞的自噬,并通过增强自噬,促进巨噬细胞的脂质代谢,减少泡沫细胞的形成。
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.5

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本文编号：2655051