ITGBL1在髓系肿瘤中的表达水平和甲基化态势的临床意义

发布时间：2020-05-23 14:56

【摘要】：目的整合素β样1基因(Integrin beta-like 1,ITGBL1)定位于染色体13q33.1,从成骨细胞cDNA文库中克隆所得。虽然ITGBL1是EGF样蛋白家族的一员,但它既不包含跨膜结构域也不包含RGD(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)结合结构域,这提示了ITGBL1基因可能执行着与整合素不同的功能。近年来越来越多的研究表明ITGBL1基因在肿瘤发生发展中起着重要的作用。然而ITGBL1基因在髓系肿瘤中的表达水平和甲基化态势及其临床意义目前尚无文献报道。本研究旨在探索ITGBL1基因在髓系肿瘤中的表达水平和启动子区Cp G岛的甲基化状态,并且进一步分别研究ITGBL1基因的表达和甲基化水平与临床系数以及患者预后的相关性。方法1、收集36例正常对照、144例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者、60例慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和20例骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者的骨髓单个核细胞,运用实时定量PCR检测ITGBL1基因的表达水平并且进一步分析其临床相关性。2、采用甲基化特异性PCR和亚硫酸氢盐测序方法检测29例正常对照、131例AML患者、60例CML患者和66例MDS患者的骨髓单个核细胞中ITGBL1基因的甲基化态势并且进一步分析其临床相关性。3、运用SPSS 20.0软件对髓系肿瘤中ITGBL1基因表达和启动子区甲基化水平进行相关性分析。结果与对照组相比,ITGBL1基因在髓系肿瘤中均呈现出不同程度的低表达和高甲基化态势。1、ITGBL1在AML中的表达水平和甲基化态势在AML患者中ITGBL1表达水平显著低于对照组(P=0.004)。ITGBL1低表达组的原始细胞计数明显高于高表达组(P=0.005)。ITGBL1低表达组良好核型的频率相对较低(P=0.028)。核型分析显示ITGBL1低表达组患者染色体出现t(15;17)的比例较低(P=0.001),而具有正常染色体核型患者的比例较高(P=0.041)。AML患者中ITGBL1低表达组患者的完全缓解(CR)率和总体生存期(OS)显著低于高表达组患者(P=0.027和P=0.016)。与对照组相比,AML患者的ITGBL1甲基化水平明显升高(P0.001)。在所有AML病例和非急性早幼粒细胞白血病病例中,与ITGBL1低甲基化患者相比,ITGBL1高甲基化患者的OS和无病生存期(LFS)均明显缩短,差异有统计学意义(P=0.009和0.023;P=0.043和0.039)。Cox多因素分析证实,ITGBL1甲基化在所有AML患者和非急性早幼粒细胞白血病患者中可作为影响预后的独立危险因素(P=0.030和P=0.020)。同时,诱导治疗后获得CR的11例随访AML患者的ITGBL1甲基化水平显著降低(P=0.001)。根据Spearman相关分析发现在AML患者中,ITGBL1表达水平与其甲基化态势水平呈负相关关系(R=-0.328,P=0.008)。2、ITGBL1在CML中的表达水平和甲基化态势在CML患者中,ITGBL1基因表达水平与对照组相比显著降低(P=0.031)。与ITGBL1高表达组患者相比,低表达组患者有较低的血小板水平(P=0.005)。而且ITGBL1低表达组患者有较高的BCR-ABL1水平(P=0.067)。根据RQ-MSP结果显示与对照组相比ITGBL1基因在CML患者中的甲基化水平呈现高甲基化态势(P=0.039)。临床相关性分析发现,ITGBL1高甲基化组患者较低甲基化组患者有较低的血小板水平(P=0.021)。根据Spearman相关分析发现在CML患者中ITGBL1基因的表达水平与其甲基化态势呈现负相关关系(R=-0.35,P=0.04)。3、ITGBL1在MDS中的表达水平和甲基化态势在MDS患者中ITGBL1基因的表达水平与对照组相比显著降低(P=0.037)。同时,与对照组相比,ITGBL1基因在MDS患者中的甲基化水平呈高甲基化态势(P0.001)。生存分析发现在MDS患者中ITGBL1高甲基化组患者的OS显著低于ITGBL1低甲基化组的患者(P=0.014)。Cox多因素回归发现在MDS患者中ITGBL1高甲基化在影响患者预后方面接近于有统计学意义(P=0.084)。结论1、ITGBL1低表达、高甲基化在髓系肿瘤中是常见的一种分子事件;2、ITGBL1高甲基化在AML中可作为影响患者预后的独立危险因素;3、在AML和CML患者中,ITGBL1甲基化与其表达水平呈负相关关系。
【图文】：

示意图,整联蛋白,主要结构,示意图

图 1.1 TIED 与β整联蛋白主要结构特征的比较示意图。EGF 样重复序列根据它们的交替同源性进行编号和着色。SP：信号肽；TM：跨膜结构域；Cyto：细胞质结构域。Fig 1.1 Comparison of Main Structural Features of TIED and β Integrin. EGF-like repeats arenumbered and colorized based on their alternate homology. SP: signal peptide; TM:transmembrane domain; Cyto: cytoplasmic domain.1.2 AML 与表观遗传学调控急性髓系白血病（AML）是一种造血干细胞（HSC）和祖细胞的恶性疾病，中位发病年龄约为 67 岁，每年发病率约为 3-8/100000[34-36]。其特征在于健康造血细胞的破坏和低产量，这些改变能够抑制细胞的分化并诱导细胞的增殖或聚集从而替代正常的造血细胞，引发正常细胞的减少[37, 38]。未成熟细胞的积累始于骨髓，但大多数情况下在血液中迅速积聚，有时会扩散到身体的其他部位，如淋巴

技术路线图,甲基化,相对量,临床资料

的标本分装成每管 2 微升，置于-80℃冰箱中以备用。2、收集每个病人的具体临床资料如：性别、年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白计数、血小板计数、骨髓原始细胞计数、染色体核型等，制成表格以用于分析3、使用 Premier Primer5 和 MethPrimer 软件分别设计 ITGBL1 基因的表达和甲基化引物，，根据引物序列合成引物，摸索确定 PCR 反应体系的条件，分别进行RQ-PCR和RQ-MSP扩增检测大批量样本中ITGBL1基因的表达水平和甲基化态势，获得 Ct 值，计算相对量分析结果。4、设计 BSP 引物，合成引物后，摸索确定 PCR 反应体系条件，PCR 扩增后将产物进行琼脂糖凝胶电泳，将产物纯化回收、克隆后测序，分析 CpG 岛上甲基化密度。5、将计算获得的相对量录入临床资料表中，运用 SPSS 20.0 统计软件分析数据评价 ITGBL1 基因在髓系肿瘤中的表达水平和甲基化态势，并分别分析其临床意义以及 ITGBL1 基因甲基化与其表达水平的相关关系。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733

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