高迁移率族蛋白B1在右侧颈交感干离断改善心肌梗死后心室重构中的作用及机制

发布时间：2020-06-07 19:09

【摘要】：第一部分右侧颈交感干离断对大鼠心肌梗死后心功能及心室重构的影响目的:观察右侧颈交感干离断对大鼠心肌梗死后心功能及心室重构的影响。方法:24只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、心肌梗死(MI)组和心肌梗死+右侧颈交感神经干离断(MI+TCST)组。结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型,MI+TCST组行左冠状动脉前降支结扎后立即离断右侧颈交感神经干。术后4周超声心动图检测各组大鼠心脏结构和功能;右侧颈总动脉插管监测各组大鼠血流动力学变化;然后处死大鼠,取心脏计算心脏质量指数;HE染色、Masson染色观察梗死周边区心肌组织病理学改变及间质纤维化情况;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;western blotting检测梗死周边区心肌组织Bax、Bcl-2和Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、III型胶原(collagen III)蛋白的表达。结果:1.超声心动图结果:与Sham组比较,MI组LVEDd、LVESd显著增加(P0.05),而LVEF、LVFS显著降低(P0.05)。与MI组比较,MI+TCST组LVEDd、LVESd显著减小(P0.05),而LVEF、LVFS显著升高(P0.05)。2.血流动力学结果:与Sham组比较,MI组LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax显著降低(P0.05),LVEDP显著升高(P0.05)。与MI组比较,MI+TCST组LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax显著升高(P0.05),LVEDP显著降低(P0.05)。3.心脏质量指数变化:与Sham组比较,MI组HW/BW、LVW/BW和LVW/HW均显著升高(P0.05)。与MI组相比,MI+TCST组HW/BW、LVW/BW和LVW/HW均显著降低(P0.05)。Sham组、MI组、MI+TCST组在RV/HW方面差异无统计学显著性(P0.05)。4.HE染色结果:Sham组心肌细胞呈圆形,排列整齐,细胞核位于中央,横纹清晰,可见少量炎性细胞浸润;MI组心肌细胞皱缩,胞质浓染,细胞核固缩、碎裂,心肌纤维溶解、断裂,炎症细胞浸润明显,细胞间隙大量纤维组织增生;MI+TCST组心肌组织结构破坏明显改善,炎症细胞浸润及纤维组织增生明显减少。5.心肌细胞凋亡测定结果:与Sham组比较,MI组促凋亡蛋白Bax显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2显著减少,梗死周边区心肌细胞凋亡明显增加(P0.05)。与MI组比较,MI+TCST组促凋亡蛋白Bax显著减少,抗凋亡蛋白Bcl-2显著增加,梗死周边区凋亡心肌细胞明显减少(P0.05)。6.心肌纤维化测定结果:Masson染色结果显示:与Sham组比较,MI组可见大量增生蓝色胶原纤维,排列紊乱,心肌组织胶原容积分数(CVF)显著增加(P0.05);与MI组比较,MI+TCST组心肌组织胶原容积分数(CVF)显著减少(P0.05)。western blotting检测梗死周边区心肌组织Ⅰ型、III型胶原蛋白的表达,结果显示:与Sham组比较,MI组Ⅰ型、III型胶原蛋白的表达显著增加,Ⅰ/III胶原蛋白的比值显著升高(P0.05);与MI组比较,MI+TCST组Ⅰ型、III型胶原蛋白的表达显著减少,Ⅰ/III胶原蛋白的比值显著降低(P0.05)。结论:1.右侧TCST可抑制心肌肥厚,减缓心室重构,提高大鼠心肌梗死后心脏功能。2.右侧TCST可显著降低大鼠心肌组织促凋亡蛋白Bax的表达,并增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。3.右侧TCST可调节Ⅰ、III型胶原蛋白的表达,减轻心肌纤维化。第二部分右侧颈交感干离断对大鼠心肌梗死后炎症反应及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响目的:探讨右侧颈交感干离断对大鼠心肌梗死后炎症反应及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达的影响。方法:结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型,将造模成功的大鼠随机分为心肌梗死(MI)组、心肌梗死+右侧颈交感干离断(MI+TCST)组,MI+TCST组在左冠状动脉前降支结扎后立即离断右侧颈交感神经干。MI组和MI+TCST组按模型制备及干预后1、3、7、14、28 d分为5个亚组,假手术(Sham)组,只穿线不结扎。定量PCR法检测不同时间点梗死边缘区HMGB1、TNF-α和IL-6的m RNA表达。Western blot分析MI后不同时间点梗死边缘区HMGB1、TLR4蛋白的表达变化,并进一步分析右侧TCST对HMGB1和TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达的影响。结果1.心肌组织HMGB1、TNF-α及IL-6的m RNA表达情况:与Sham组比较,MI后1 d心肌组织早期炎症因子TNF-α、IL-6的m RNA表达上调,3 d组最高,7 d后开始下降,28 d仍明显高于Sham组(P0.05);晚期炎症因子HMGB1 m RNA在MI后3 d表达上调,7 d组最高,之后开始下降,28 d仍明显高于Sham组(P0.05)。与MI组比较,MI+TCST组各对应时间点亚组中心肌组织HMGB1、TNF-α、IL-6的m RNA表达均有所下调,28 d后IL-6的m RNA水平与Sham组间无显著差异(P0.05)。2.AMI后不同时间点心肌组织HMGB1、TLR4的蛋白表达变化:与Sham组比较,MI后3 d HMGB1蛋白表达增加,并于梗死后7 d达到高峰,之后开始下降,MI后28 d仍明显高于Sham组(P0.05);TLR4蛋白的表达变化与HMGB1一致。3.心肌组织HMGB1和TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况:与Sham组比较,心肌梗死后7 d心肌组织中HMGB1、TLR-4、My D88和NF-?Bp65蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与MI组比较,MI+TCST组HMGB1、TLR-4、My D88和NF-?Bp65蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论1.心肌梗死后炎症反应增强,梗死周边区炎症因子TNF-α、IL-6表达上调,右侧TCST可下调炎症因子的表达,抑制MI后炎症反应。2.HMGB1是一种晚期炎症因子,出现时期晚于TNF-α、IL-6,而持续时间较长,这可能是MI后炎症反应持续的重要原因。3.TLR4-NF-κB信号通路在AMI后炎症反应过程中发挥重要作用。右侧TCST可抑制HMGB1的表达,减少HMGBl与细胞膜上的TLR4受体结合,最终抑制NF-?Bp65的激活,从而减少炎症因子的释放,减轻炎症反应,这可能是右侧TCST减轻MI后炎症反应的作用途径之一。
【图文】：

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图 1 各组大鼠 M 型超声心动图Fig.1 M-mode echocardiograms obtained with two-dimensional guidance from a short-axismidventricular view from rats of all groups. A sham operation group; B MI group; CMI+TCST group.表 1 各组大鼠超声心动图结果比较

24图 2 各组大鼠 MI 后梗死周边区心肌形态学变化(×400)Fig.2 Pathomorphological variance of myocardial tissues(×400).A sham operation group; BMI group; C MI+TCST group.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.22

【参考文献】