miR-455b-3p调控脂肪细胞中APN表达及其机制研究

发布时间：2020-06-12 14:37

【摘要】：目的:探讨冠心病(Coronary Artery Disease,CAD)患者心外膜脂肪组织(Epicardial Adipose Tissue,EAT)和血清中脂联素(adiponectin,APN,ADIPOQ)相关差异表达mi R-455b-3p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4(KLF4)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞因子趋化蛋白1(MCP-1)分泌以及对脂肪细胞分化的影响,阐明mi R-455b-3p在CAD发生发展过程中对脂肪细胞分化和炎症反应影响的可能机制。方法:1、选取受试个体冠心病(CAD)34例和非冠心病(Non-CAD)组16例,收集EAT和血清标本,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)验证两组标本中mi R-455b-3p表达水平。2、在体外培养测成熟脂肪细胞中炎症因子APN、KLF4、IL-6、MCP-1 m RNA表达水平。3、分别转染3T3-L1前脂肪细胞,实验组分为mi R-455b-3p过表达组(转染mi R-455b-3p模拟物)、抑制剂组(转染mi R-455b-3p抑制剂)和空白对照组。分别转染mi R-455b-3p agomir、antagomir和NC至离体培养的已诱导成熟3T3-L1脂肪细胞,q RT-PCR检mi R-455b-3p agomir、antagomir和NC至离体培养的3T3-L1前脂肪细胞,诱导8天后油红O染色观察脂滴积累情况,q RT-PCR检测脂肪细胞中脂肪细胞分化成熟标志物FABP4、PPARγ及C/EBPαm RNA和APN、FABP4蛋白的表达水平。结果:1.人体组织实验(1)受试个体一般资料、血脂及血浆炎症因子水平比较CAD组低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-c)和超敏C反应蛋白高于non-CAD组,高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL-c)和ADIPOQ低于non-CAD组,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)受试个体EAT组织及血清中mi R-455b-3p表达水平与non-CAD组相比,CAD组EAT和血清中mi R-455b-3p表达均升高(P0.01)。2.体外细胞实验(1)3T3-L1脂肪细胞的培养及诱导分化未诱导分化的3T3-L1细胞呈梭形,胞浆中无脂滴;诱导分化至第8天,细胞呈椭圆形,90%以上细胞均分化成熟,有较多的脂滴聚集。油红O染色结果显示,脂肪细胞中的形成的脂滴被染成红色,成功诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞。(2)检测mi R-455b-3p对脂肪细胞炎症因子的调控作用与NC组相比,成熟3T3-L1脂肪细胞中mi R-455b-3p过表达组APN、KLF4m RNA表达降低,IL-6、MCP-1表达升高(P0.05);mi R-455b-3p抑制剂组中,APN、KLF4表达升高,IL-6、MCP-1表达降低(P0.05)。(3)检测mi R-455b-3p对脂肪细胞分化的影响在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中mi R-455b-3p表达水平先上升后下降,最后快速上升。与对照组相比,mi R-455b-3p过表达组成熟脂肪细胞中脂滴积累增多,脂肪细胞分化标志物FABP4、PPARγ、C/EBPαm RNA表达升高,FABP4蛋白表达升高,APN蛋白表达降低(P0.05)。结论:(1)在CAD患者EAT中存在差异性表达的mi RNAs,其中mi R-455b-3p高表达;(2)高表达的mi R-455b-3p负调控APN的表达,并且影响脂肪细胞因子KLF4、IL-6以及MCP-1的表达,使炎症加剧;(3)在脂肪细胞中,mi R-455b-3p促进脂肪细胞分化成熟。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.4

【参考文献】