金属蛋白酶ADAMTS1对主动脉夹层的作用及机制研究
发布时间：2020-06-18 02:49
【摘要】：研究背景及目的主动脉夹层是心血管系统的高危疾病,其发病凶险,死亡率高,近年来发病率呈逐年上升趋势,目前临床上尚缺乏安全有效的药物治疗方法。主动脉夹层的病理生理特点主要表现为细胞外基质降解、炎症细胞浸润和血管平滑肌细胞凋亡,但具体的发病分子机制尚不明确。ADAMTS1(I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶1)可以通过降解多种细胞外基质蛋白参与细胞外基质重构,同时也是一种炎症相关蛋白。我们的前期研究发现,ADAMTS1与主动脉夹层发病密切相关,但ADAMTS1在主动脉夹层发病过程中具体发挥怎样的作用以及起作用的关键环节尚不清楚。因此,本研究将在小鼠动物模型中明确ADAMTS1在主动脉夹层中的作用并探索相关机制。实验方法构建ADAMTS1flox/flox小鼠和ADAMTS1全身条件诱导敲除小鼠来探究ADAMTS1在主动脉夹层发病过程中的作用。通过连续给予3周雄性ADAMTS1 flox/flox小鼠和ADAMTS1诱导敲除小鼠β-氨基丙腈(BAPN)(1.0 g/kg/d)28天建立小鼠主动脉夹层模型。采用 Real time-PCR、Western Blot、组织病理学、ELISA、transwell以及流式细胞术等实验方法探究ADAMTS1在主动脉夹层发病过程中的作用及分子机制。实验结果我们成功建立了 BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型,发现在BAPN诱导早期的主动脉组织中,ADAMTS1的mRNA水平和蛋白水平与对照组相比均明显升高,免疫组化结果显示AD AMTS 1主要表达于血管外膜中。在BAPN诱导的主动脉夹层模型中,与ADAMTS1 flox/flox组小鼠相比,ADAMTS1诱导敲除组小鼠的主动脉夹层发生率及破裂率均明显降低,分别由81.8%和42.4%降至45.5%和18.2%,生存率也明显降低。HE染色和弹力板染色显示ADAMTSflox/flox组小鼠的主动脉组织中弹力纤维断裂明显,假腔形成,中膜内间隙明显增宽,假腔中充满了大量的红细胞,而ADAMTS1诱导敲除组小鼠的主动脉组织中弹力纤维排列整齐,相对较完整。在BAPN诱导早期,ADAMTS1flox/flox组小鼠的血管外膜中可见中性粒细胞和巨噬细胞浸润明显增加,主动脉组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1的mRNA水平明显升高,并且外周血中的中性粒细胞比例及IL-6和MCP-1水平明显增多,这些现象均在ADAMTS1敲除后被明显抑制。我们通过在体和离体实验发现敲除ADAMTS1能够明显抑制巨噬细胞的迁移能力。此外,我们还发现在所建立的小鼠主动脉夹层模型中,基底膜蛋白nidogen-2的蛋白水平随着ADAMTS1蛋白水平的增加而减少,而在ADAMTS1敲除后,该现象发生了明显逆转。实验结论我们成功建立了 BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型和ADAMTS1全身条件诱导敲除小鼠,在此基础上,我们发现敲除ADAMTS1可以抑制主动脉夹层发生和发展,其作用机制可能与ADAMTS1调控炎症反应和降解nidogen-2相关。这些发现提示ADAMTS1可能成为主动脉夹层的新治疗靶点。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.1
【图文】：
进行了检测，发现在ＢＡＰＮ诱导主动脉夹层发生早期，主动脉组织中ＡＤＡＭＴＳ１逡逑的ｍＲＮＡ水平与对照组相比已有明显升高，并且在ＢＡＰＮ饮水１４天时达到高峰，随逡逑后ＡＤＡＭＴＳ１的ｍＲＮＡ７Ｋ平稍有降低，但仍明显高于对照组（图１Ａ）；邋ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ逡逑结果显示ＡＤＡＭＴＳ１的蛋白水平随着ＢＡＰＮ饮水时间的延长而逐渐X椉樱ㄍ迹保拢诲义显谄胀ㄒ樾∈笾校粒腻澹粒停裕渝澹钡模恚遥危梁偷鞍妆泶锼骄系停欢苑⑸酥鞫义下黾胁阈∈蟮闹鞫鲎橹忻庖咦榛旧⑾郑诟瑁拢粒校我螅∈笾鞫义下鲎橹械模粒模粒停裕樱彼矫飨陨撸⑶抑饕泶镉谘芡饽ぶ校ㄍ迹保茫澹模ｅ义险庑┙峁崾荆粒模粒停裕樱痹冢拢粒校斡盏嫉闹鞫黾胁惴⒉」讨锌赡芊⒒恿酥匾麇义嫌谩ｅ义希危洛澹拢粒校五澹板澹洌幔澹峰澹洌幔箦澹保村澹洌幔箦澹玻卞澹洌幔箦澹玻稿澹洌幔箦义希危卞危粒模粒停裕樱欤郏皱澹垮澹邋义希保矗诲濉ⅲ椋у危瑁五五危保担靛澹
本文编号：2718573
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.1
【图文】：
进行了检测，发现在ＢＡＰＮ诱导主动脉夹层发生早期，主动脉组织中ＡＤＡＭＴＳ１逡逑的ｍＲＮＡ水平与对照组相比已有明显升高，并且在ＢＡＰＮ饮水１４天时达到高峰，随逡逑后ＡＤＡＭＴＳ１的ｍＲＮＡ７Ｋ平稍有降低，但仍明显高于对照组（图１Ａ）；邋ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ逡逑结果显示ＡＤＡＭＴＳ１的蛋白水平随着ＢＡＰＮ饮水时间的延长而逐渐X椉樱ㄍ迹保拢诲义显谄胀ㄒ樾∈笾校粒腻澹粒停裕渝澹钡模恚遥危梁偷鞍妆泶锼骄系停欢苑⑸酥鞫义下黾胁阈∈蟮闹鞫鲎橹忻庖咦榛旧⑾郑诟瑁拢粒校我螅∈笾鞫义下鲎橹械模粒模粒停裕樱彼矫飨陨撸⑶抑饕泶镉谘芡饽ぶ校ㄍ迹保茫澹模ｅ义险庑┙峁崾荆粒模粒停裕樱痹冢拢粒校斡盏嫉闹鞫黾胁惴⒉」讨锌赡芊⒒恿酥匾麇义嫌谩ｅ义希危洛澹拢粒校五澹板澹洌幔澹峰澹洌幔箦澹保村澹洌幔箦澹玻卞澹洌幔箦澹玻稿澹洌幔箦义希危卞危粒模粒停裕樱欤郏皱澹垮澹邋义希保矗诲濉ⅲ椋у危瑁五五危保担靛澹
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