血管紧张素-（1-7）在腹主动脉瘤发病中的作用及机制研究

发布时间：2020-06-22 08:22

【摘要】：研究目的腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是指腹主动脉局部梭形或囊形膨胀,管腔内径超过正常值50%的一种病理状态。由于大多数AAA患者在动脉瘤破裂之前并无症状,从而导致AAA有高达80%的死亡率,因此预防AAA的形成和进展是行之有效的方法。虽然AAA的主要病理特征是动脉中层基质的降解、血管平滑肌细胞的减少和炎性细胞的浸润,但导致这些病理改变的发病机制仍不清楚。因此,“AAA”仍是“无药可治”的现状。近年来,随着分子生物学和药理学的飞速发展,肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)在AAA发病机制中的重要作用越来越引起大家的重视。RAS新成员——血管紧张素转换酶-2(angiotensin-converting enzyme-2,ACE2)和血管紧张素-(1-7)[angiotensin-(l-7),Ang-(l-7)]在心血管研究领域受到了更多的关注。最新的研究表明,Ang-(1-7)能够抑制载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E-knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化病变的形成,增强动脉粥样硬化斑块的稳定性,从而起到血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)的反作用因子作用。本实验室课题组通过实验进一步证实了 ACE2基因通过抑制炎症反应和基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)的激活从而显著抑制ApoE-/-小鼠AAA的形成。然而,Ang-(1-7)对于AAA的发生率和严重程度的直接影响仍不清楚。为了验证Ang-(1)可以通过抑制血管炎症、细胞外基质降解和平滑肌细胞凋亡而减轻AAA的假说,我们采用Ang Ⅱ输注ApoE-/-小鼠来建立AAA动物模型。研究方法在体内实验中,100只雄性ApoE-/-小鼠随机分为5组(每组20只):依次为对照组、AngⅡ组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+A779组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+PD1233 19组。所有小鼠在高脂喂养4周后使用植入式渗透压泵在皮下连续输注不同的药物,时间为4周。输注药物4周后,将所有小鼠安乐死后取材进行进一步的病理学研究和数据统计分析。在体外实验中,我们采用了 RAW264.7小鼠巨噬细胞系和人原代平滑肌细胞(human primary smooth muscle cells,HSMCs)来进行细胞实验。细胞分组情况依次为:对照组、AngⅡ组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+A779组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+PD123319组。用体内实验和体外实验收集的样本通过免疫印迹检测(Western blot)、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、组织学和免疫组化染色、TUNEL法等方法进行检测。数据统计分析采用SPSS 18.0,计量资料采用均数±标准误来表示,比较各组之间的数据时选择t检验、卡方检验、ONE-WAY ANOVA等方法进行统计分析。P0.05表示数据具有统计学意义。结果在体内实验中,Ang-(1-7)能够降低Ang Ⅱ诱导的ApoE-/-小鼠AAA的发病率和严重程度,这其中的机制可能与其抑制巨噬细胞的浸润、抑制白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotease2,MMP2)的表达,以及减少腹主动脉瘤组织中平滑肌细胞的凋亡有关。然而,在小鼠中加入A779或PD123319能够逆转Ang-(1-7)对AAA的有益作用。在体外实验中,Ang-(1-7)显著降低了巨噬细胞中Ang Ⅱ刺激诱导所致的IL-6、TNF-α、MCP-1的mRNA表达。在平滑肌细胞中,Ang-(1-7)显著降低了 Ang Ⅱ刺激诱导所致的细胞凋亡以及MMP2的活性和蛋白表达水平。这其中的分子机制可能涉及Ang-(1-7)通过刺激Mas受体(Mas receptor,MasR)和血管紧张素Ⅱ 2型受体(angiotensin Ⅱ type 2 receptor,AT2R)来抑制细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)的信号通路。结论综上所述,我们的实验研究表明,在AngⅡ刺激诱导的AAA小鼠模型中,Ang-(1-7)可通过减轻炎症反应、降低MMP活性和蛋白表达和减少平滑肌细胞凋亡从而显著减轻AAA的形成和严重程度。这其中的分子机制可能涉及Ang-(l-7)通过刺激MasR和AT2R而抑制ERK1/2的信号通路。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.1
【图文】：

图１．邋Ａｎｇ－（ｌ－７）对Ａｎｇ邋ＩＩ诱导的ＡｐｏＥ－Ａ小鼠中ＡＡＡ的发生率和瘤最大直径的影逡逑响。逡逑Ａ，邋５组小鼠中形成的ＡＡＡ的代表性图片；Ｂ，邋５组小鼠中ＡＡＡ的发生率的比逡逑较（ｎ＝２０）；邋Ｃ，５组小鼠中腹主动脉最大直径的比较（ｎ＝５）。＊，与对照组相比，逡逑Ｐ＜０．０５；邋＃，与邋Ａｎｇｌｌ组相比，Ｐ＜０．０５；邋▲，与邋ＡｎｇＩＩ邋＋邋Ａｎｇ－（ｌ－７）组相比，尸＜０．０５。逡逑４７逡逑

ＰＤ１２３３１９邋－逦－逦－逦－逦＋逡逑图２．邋Ａｎｇ－（ｌ－７）对Ａｎｇｌｌ诱导的ＡｐｏＥ＂？小鼠中ＡＡＡ弹力纤维的影响。逡逑，邋５组小鼠中腹主动脉组织ＨＥ染色和Ｖｅｒｈｏｆｆ染色的代表性图片。下面一行图逡逑为上面图片中红色线框区域的放大。Ｂ，５组小鼠中血管壁弹力纤维破裂程度逡逑评估和量化分析（ｎ＝５）。＊，与对照组相比，尸＜０．０５；邋＃，与Ａｎｇｌｌ组相比，尸逡逑０．０５；邋▲，与邋ＡｎｇＩＩ邋＋邋Ａｎｇ－（ｌ－７）组相比，尸＜０＿０５。逡逑８逡逑

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本文编号：2725459