miR-499-5p通过靶调节Sox6抑制大鼠心梗后心肌细胞凋亡

发布时间：2020-07-03 18:50

【摘要】：目的探究大鼠梗死心肌miR-499-5p表达量改变和miR-499-5p在大鼠心梗后心肌细胞凋亡中的作用及相关机制。方法通过结扎Sprague Dawley大鼠心脏冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,分别检测大鼠左前降支冠脉结扎前、结扎1h、6h、48h后梗死心肌和非梗死心肌miR-499-5p表达;采用心肌内注射miR-499-5p mimics的方法上调大鼠心肌组织中的miR-499-5p表达水平;大鼠被随机分为假手术组(Sham)、心梗组(AMI)、miR-499-5p类似物干预组(AMI+miR-499-5p mimics)、阴性对照组(AMI+scramble-NC)。TTC染色法测心肌梗死面积;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;qRT-PCR检测心肌miR-499-5p、Sox6mRNA表达;Western blot分析组织蛋白Sox6、Bax、Bcl-xl表达;超声心动图评估心功能;荧光素酶报告实验检测miR-499-5p是否靶向调控SOX6 3'非编码区。结果1.qRT-PCR:梗死心肌miR-499-5p表达较非梗死心肌降低。与AMI+scramble-NC组比较,AMI+miR-499-5p mimics组mi R-499-5p表达增加(1.068±0.647vs8.292±1.079,P0.01);AMI组Sox6 m RNA较Sham组增高,而AMI+miR-499-5p mimics组Sox6 mRNA表达较AMI+scramble-NC、AMI组降低;2.TTC染色法提示:与AMI+scramble-NC组比较,AMI+miR-499-5p mimics组心肌梗死面积减小(0.658±0.113vs0.381±0.121,P=0.02);3.TUNEL染色提示:与Sham组比较,AMI组心肌细胞凋亡率(%)增高(60.435±6.004),与AMI+scramble-NC、AMI组比较,AMI+miR-499-5p mimics组心肌细胞凋亡率降低(35.643±3.923);4.Western blot检测结果:与Sham组比较,AMI组Sox6和Bax蛋白表达增高,Bcl-xl蛋白表达降低;与AMI+scramble-NC、AMI组比较,AMI+miR-499-5p mimics组Sox6和Bax蛋白表达降低,Bcl-xl蛋白表达增加;5.心脏彩超结果:与Sham组比较,AMI组EF值(%)降低(29.230±4.379)、FS值(%)降低(17.440±3.595)(P均0.05);与AMI+scramble-NC、AMI组比较,AMI+miR-499-5p mimics组EF增加(58.200±8.925),FS值增加(30.310±3.431)(P均0.05)6.荧光素酶报告实验:miR-499-5p特异性调控Sox6 3'末端非编码序列。结论1.大鼠梗死心肌miR-499-5p表达量下降2.miR-499-5p抑制心梗后心肌细胞凋亡并改善心功能,可能通过靶向抑制Sox6,进一步降低促凋亡蛋白Bax表达并增加抗凋亡蛋白Bcl-xl表达来实现
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.22
【图文】：

核苷酸序列,急性心肌梗死,心脏

图 1 急性心肌梗死模型的制作2.2.3 大鼠心肌内注射短核苷酸序列和实验分组挑破大鼠心包暴露心脏前壁，按上述方法有效结扎 LAD 后，参照商家说明书和参考文献[34]，即用胰岛素笔将 miR-499-5p mimics（1.4ug/100g）或Scramble-NC(1.4ug/100g)与 Lipofectamine2000 混合液共 20ul（容积比 1:1）注射到结扎部位以下左室前壁心肌梗死边缘区。挤出胸腔内空气后逐层缝合关胸。手术大鼠随机分成 4 组： Sham 组， AMI 组， AMI+scramble-NC 组，AMI+miR-499-5p mimics 组，每组 20 只。2.2.4 心肌组织取材、病理切片制作2.2.4.1 心脏组织取材10%的水合氯醛腹腔注射重新麻醉大鼠并采用颈椎脱臼法处死，剪取心脏，预冷 PBS 缓冲液反复冲洗心脏直到无残血后置于 4%的多聚甲醛固定 24 小时以

电图,分组设计,表达水平,大鼠

图 2：LAD 结扎前、后心电图3.2 梗死心肌 miR-499-5p 表达降低本研究在分组设计之前比较了大鼠梗死心肌区和非梗死心肌区 miR-499-5p表达水平，即在 LAD 结扎 1h、6h、48h 时，大鼠心肌组织梗死区域 miR-499-5p的表达量较非梗死区域均下降（图 3），p 值均<0.05。

【参考文献】