ZFP580及eNOS在小鼠心肌缺血模型中的表达及其意义

发布时间：2020-07-16 00:35

【摘要】：目的:探讨锌指蛋白580(ZFP580)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)在异丙肾上腺素(ISO)致小鼠心肌缺血模型中的表达情况,为阐明心肌缺血疾病的发病机制提供新的实验依据。方法:1将50只雄性成年昆明小鼠随机分为5组,(1)对照组;(2)ISO,0.25mg/kg组,(3)ISO,1mg/kg组,(4)ISO,2.5mg/kg组,(5)ISO,5mg/kg组,每组10只。行ISO小鼠腹腔注射,在小鼠腹腔注射ISO后5分钟,采用BL-420生物功能实验系统,对参与试验的小鼠Ⅱ导联心电图进行记录,当发现波形于ST段抬高,T波高耸,表现为典型心肌缺血心电图波形,证明造模成功,继而进行后续实验;处死小鼠前行摘眼球放血并收集血液,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水后同法处死。2收集小鼠血清行生化指标监测:主要生化指标包括LDH及和CK活性数据。采用3000r/min对血清进行离心处理,并利用分光光度计对上述两项指标进行检测。3心肌组织形态学指标检查:对采集到的心尖部位组织进行固定、脱水、包埋处理,利用对所制组织切片进行观察,获取缺血心肌在形态上的变化情况。4定量RT-PCR检测ZFP580m RNA及e NOS的表达:通过对Trizol试剂的有效利用,完成对心肌中总RNA的提取工作。取所获取的定量总RNA(400μg)10μl体系,经过逆转录形成c DNA第一链。对c DNA模板(10μl)进行简单处理后,再与靶基因ZFP580上下游引物融合,采用PCR对50μl体系进行反应。以GAPDH为内参照,监测ZFP580及e NOS基因的相对表达量。5心肌组织的染色观察:对心肌组织进行HE和免疫组织化学染色操作,并于显微镜下对着色情况进行观察。对其中阳性细胞进行计数,最低计数200个心肌细胞,以阳性细胞占视野内心肌细胞总数的百分比表示阳性率。载玻片阳性率取平均值。阴性对照:用0.01mol/L PBS代替一抗,其余步骤基本相同。6统计学分析:全部试验数据均采用均数±标准差表示,应用SPSS11.5软件进行统计学分析(初步数据分析采用excel分析)。采用单因素方差表示组间差异,其中显著性差异者用Student-Newmen-Kuels q检验,并进行两两比较。结果:1 ISO对小鼠ECG中ST段、T波及血清LDH、CK活性的影响完成对小鼠的ISO腹腔注入后,小鼠表现为ST、T段抬升,表明小鼠出现典型的心肌缺血ECG改变,即模型制备成功。模型组小鼠LDH、CK活性两项指标,较对照组有明显提升(P0.5)2 ISO对小鼠心肌形态学的影响对心肌的形态学观察,Masson染色显示对照组心肌细胞排列整齐,心肌免疫反应着色为黄色。完成ISO注入后的实验组小鼠心肌细胞排列相对紊乱,心肌多处呈现不规则坏死灶,并有明显的炎症细胞侵润表现。缺血心肌染色为红色。HE染色可见缺血心肌细胞核皱缩不规则,发生空泡样变性。3小鼠缺血心肌细胞ZFP580m RNA及e NOS的表达锌指基因ZFP580及e NOS在心肌缺血损伤中表达均降低,提示ZFP580及e NOS在心肌缺血发挥了某种调控功能,对心肌起保护作用。同时,研究结果显示ISO可能影响心肌细胞中ZFP580的转录及其翻译,其具体机制尚不完全明确。4小鼠缺血心肌细胞ZFP580蛋白及e NOS蛋白的表达ZFP580定位于细胞核及细胞质中,黄色染色细胞代表阳性反应细胞,在实验组小鼠心肌的ZFP580阳性细胞比例较对照组明显偏低。e NOS蛋白均以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞,与对照组相比也明显偏低。结论:ZFP580及e NOS在异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血模型中的表达,随心肌缺血性损伤而降低。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2;R-332

【参考文献】