乙基苯基聚乙二醇和甲基-β-环糊精对低密度脂蛋白脂质成分和蛋白结构的影响

发布时间：2020-07-16 21:27

【摘要】：低密度脂蛋白(LDL)是人体内将胆固醇从肝脏运往外周组织和细胞的主要载体,也是导致动脉粥样硬化疾病的首要危险因素。目前对于LDL结构的研究,大多是使用X衍射、小角度散射和透射电子显微镜等技术表征LDL中主要载脂蛋白的结构,但这些研究方法普遍存在着忽视LDL生理环境或组成成分的缺陷,因而并没有形成统一的观点。关于LDL结构的研究,未来主要的挑战是阐明LDL上的载脂蛋白和脂质的分子结构特征以及它们之间的相互作用,而对LDL进行脂质剔除也许是探究LDL脂质成分与蛋白结构之间的相互作用的突破口。乙基苯基聚乙二醇(NP-40)和甲基-β-环糊精(MβCD)是生物学研究中常用的两种温和的脂质剔除试剂,能够以不同方式去除细胞等生物学结构上的脂质,但是它们能否去除LDL上的脂质及其对LDL的具体影响并不清楚。本实验采取LDL作为研究对象并使用不同浓度的NP-40和MβCD对其进行处理。使用X射线衍射能谱仪、琼脂糖凝胶电泳、全自动生化仪、Zeta粒度仪和原子力显微镜等多种仪器和方法检测NP-40和MβCD对LDL的脂质组成、形貌结构以及物理化学性质影响,通过比较分析发现:适宜浓度的NP-40和MβCD均能够造成LDL脂质成分和蛋白成分相分离的现象,但是经40-80 mM的MβCD处理分离出的载脂蛋白的电荷性质与天然状态更为接近;LDL经0.64%NP-40的溶解作用和100 mM MβCD的剔除作用后分别暴露出载脂蛋白的环状和球状结构形式;但是MβCD具有更高的胆固醇剔除率(92%)和更低的甘油三酯剔除率(58%)。研究结果表明NP-40和MβCD均能够剔除LDL的脂质成分,LDL的蛋白结构和LDL脂质成分的损失程度相关。另外,本实验表明了原子力显微镜成像技术和NP-40处理相结合能够在生理状态下检测脂蛋白的结构,琼脂糖凝胶电泳和MβCD处理相结合能够从LDL中分离出与天然状态更为接近的载脂蛋白,将为未来的研究提供新的技术方法。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5
【图文】：

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图 2.2 LDL 脂质剔除率Figure 2.2 percent of lipids depletion图 2.4 是 LDL 脂质剔除率统计图，其中图 A、图 B、图 C 分别代表 NP-剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、胆固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率；图 D、图 E图 F 分别代表 MβCD 剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、胆固醇(TCH) 、磷脂(PL)剔除率。从图中可以看出 NP-40 和 MβCD 均可以将脂质从 LDL 中剔除出去而TCH、TG、PL 的剔除率和浓度呈正相关。当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 0.16时能够显著性地剔除 LDL 的 TG 成分；当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 0.08%能够显著性地剔除 LDL 的 TCH 和 PL 成分；当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 1时能够剔除 LDL 大约 80%的 TCH、TG 和 PL。当 MβCD 浓度达到 10mM 时，能够显著性地剔除 LDL 的 PL、TCH 成分，MβCD 处理 LDL 的浓度达到 20 mM 时，能够显著性地剔除 LDL 的 TG 成分。MβCD 浓度达到 100 mM 时，能够剔除 LDL 中 90%的 PL、TCH 和 50% 的 TG为了更直观的表现同一浓度的 NP-40 和 MβCD 对 LDL 脂质成分总体效的影响，我们利用 Graphpad Prism 将数据进行汇总分析

图 2.2 LDL 脂质剔除率Figure 2.2 percent of lipids depletion图 2.4 是 LDL 脂质剔除率统计图，其中图 A、图 B、图 C 分别代表 NP-40剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、胆固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率；图 D、图 E、图 F 分别代表 MβCD 剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、胆固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率。从图中可以看出 NP-40 和 MβCD 均可以将脂质从 LDL 中剔除出去而且TCH、TG、PL 的剔除率和浓度呈正相关。当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 0.16%时能够显著性地剔除 LDL 的 TG 成分；当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 0.08%时能够显著性地剔除 LDL 的 TCH 和 PL 成分；当 NP-40 处理 LDL 的浓度达到 1%时能够剔除 LDL 大约 80%的 TCH、TG 和 PL。当 MβCD 浓度达到 10mM 时，能够显著性地剔除 LDL 的 PL、TCH 成分，当MβCD 处理 LDL 的浓度达到 20 mM 时，能够显著性地剔除 LDL 的 TG 成分。当MβCD 浓度达到 100 mM 时，能够剔除 LDL 中 90%的 PL、TCH 和 50% 的 TG。为了更直观的表现同一浓度的 NP-40 和 MβCD 对 LDL 脂质成分总体效果的影响，我们利用 Graphpad Prism 将数据进行汇总分析

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本文编号：2758530