阿米替林对大鼠Nav1.5通道的慢性阻滞效应及诱发Brugada综合征相关机制的研究

发布时间：2020-07-23 10:06

【摘要】：目的:目前阿米替林等抗抑郁药对心肌细胞钠通道的急性阻滞效应已有报道,但不能解释临床上常见的长期用药引发Brugada综合征等室性心律失常的现象,因此该研究通过比较阿米替林的急性效应和慢性效应对心室肌细胞钠通道分布及门控特性的差异,对药物诱发Brugada综合征的可能机制进行探讨。方法:以S.D.大鼠为研究对象,将大鼠随机分为1d给药组、7d给药组和对照组,比较阿米替林给药1d所致急性效应和给药7d所致慢性效应对心室肌细胞Nav1.5的影响:在动物水平观察不同用药时间对大鼠ECG的影响;在细胞水平,通过全细胞膜片钳技术观察峰钠电流密度、稳态激活曲线、稳态失活曲线、失活后恢复曲线等钠通道门控特性,通过贴附式膜片钳技术分别观察闰盘和侧膜部位钠电流密度、稳态激活曲线、稳态失活曲线、失活后恢复曲线等钠通道门控特性,比较二者差异;通过蛋白免疫印迹技术分析细胞膜Nav1.5蛋白表达量的差异;通过共聚焦显微镜观察Nav1.5在心室肌细胞的分布情况。结果:(1)阿米替林1d给药组大鼠ECG的ST段部分升高,比例约占60%,7d给药组中ST段升高的比例有所增加80%,且升高幅度较1d给药组明显(0.3±0.07 m V vs 0.1±0.09 m V,P0.05)。(2)利用全细胞膜片钳技术可知:阿米替林1d给药组的峰钠电流密度较对照组降低(-21.21±0.35 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度约为23%,7d给药组的峰钠电流密度较对照组降低(-14.63±0.75 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度约为54%;1d给药组的τ由92.68±34.48 ms延长至135.56±6.87 ms(P0.05),7d给药组的τ由92.68±34.48 ms延长至137.63±9.32ms(P0.05),但1d给药方式与7d给药方式对钠通道失活后恢复曲线的改变程度无明显差异。(3)在侧膜处,7d给药组下降幅度(-259.53±7.34 p A vs-128.76±8.52 p A,P0.05)大于1d给药组(-259.53±7.34 p A vs-166.76±7.24 p A,P0.05),在闰盘处,7d给药组下降幅度(-666.34±15.85 p A vs-286.35±9.33 p A,P0.05)大于1d给药组(-666.34±15.85 p A vs-456.13±10.65 p A,P0.05),提示在闰盘和侧模处7d给药组使钠电流下降更为明显;在侧膜处的钠通道失活后恢复曲线中,7d给药组中通道恢复时间常数(τ)(230.43±8.98 ms vs 320.13±38.22 ms,P0.05)延长程度与1d给药组(230.43±8.98 ms vs 324.47±20.67 ms,P0.05)相似,在闰盘处,7d给药组中通道恢复时间常数(τ)(210.57±26.58 ms vs 352.50±42.32 ms,P0.05)延长程度与1d给药组(210.57±26.58 ms vs 357.34±39.69 ms,P0.05)相似,两种给药方式使闰盘和侧膜处钠通道失活后恢复时间均延长更显著。(4)阿米替林两种给药方式使膜通道表达量均降低(1d:1.04±0.07 vs.0.73±0.07,P0.05;7d:1.04±0.07 vs0.544±0.08,P0.05),7d给药组更明显。(5)与阿米替林1d给药组相比,7d给药组细胞侧膜和闰盘部位红色荧光密度下降更明显,胞质内有颗粒状或小片状的荧光颗粒。结论:(1)阿米替林短期用药(1d)的急性效应和长期用药(7d)的慢性效应对大鼠心室肌细胞钠通道的均有阻滞效应,且长期用药的慢性效应更为显著。(2)阿米替林的急性效应和慢性效应对Nav1.5门控特性作用相似,主要表现在通道失活后恢复时间延长,但稳态激活和稳态失活曲线没有显著变化。(3)与阿米替林的急性效应相比,慢性效应导致细胞膜Nav1.5蛋白表达减少更显著,但二者对于钠通道门控特性影响相似,因此考虑阿米替林可能通过影响钠通道向细胞膜的迁移过程,为解决药物引发Br S提供一种新思路。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54
【图文】：

义医学院硕士学位论文 尹元立2 结果2.1 阿米替林对大鼠 ECG 的影响因临床上可见阿米替林引发 BrS，心电图有典型“三联征”表现：右胸导联1~V3 的 ST 段呈下斜型或马鞍型抬高，伴有或不伴有右束支阻滞、T 波倒置等。部分主要观察 S.D.大鼠服用阿米替林后的心电图变化。与对照组相比，1d 给药组鼠 ECG 的 ST 段部分升高，比例约占 60%（n=10），未检测到室性心律失常，7药组中 ST 段升高的比例有所增加 80%（n=10），且升高幅度较 1d 给药组明显0.3 ±0.07 mV vs 0.1±0.09 mV，P < 0.05），见图 1。

图 2. 不同给药时间对大鼠心室肌细胞峰钠电流的影响图 3 所示，钳制电压为-120 mV，当电压升至-70 mV 时开始出现钠电明钠通道开始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右达到峰值，1d 给药7d 给药组与对照组之间 I-V 曲线形状及峰值位置无明显差异。但 1d 给组的峰钠电流在（-60 mV~0 mV）电压范围内，均较对照组有明显降替林的作用存在一定的电压依赖性特征。-15-10-505ak(pA/pF)

图 7. 不同给药时间对大鼠心室肌细胞闰盘和侧膜峰钠电流的影响如图 8 所示，当电压升至-70 mV 时开始出现钠电流内流，表明钠通道开始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右达到峰值，在大鼠心室肌细胞侧膜和闰盘处，1d给药组与对照组、7d 给药组与对照组之间 I-V 曲线形状及峰值位置均无明显差异。但 1d 给药组、7d 给药组的峰钠电流在（-60 mV~0 mV）电压范围内，均较对照组有明显降低，说明阿米替林的作用存在一定的电压依赖性特征。

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本文编号：2767182