微小RNA-499抑制快速起搏致心力衰竭大鼠的心肌细胞凋亡

发布时间：2020-07-23 10:55

【摘要】：目的:右心室快速起搏是研究充血性心力衰竭(心衰)机制的经典方法,目前用于制作此类模型的多为较大动物的心衰模型。心肌细胞的凋亡是心力衰竭(心衰)的重要原因。本实验旨在建立快速起搏致心衰大鼠模型及探究微小RNA-499(Micro-RNA 499,MiR-499)在非缺血性心衰中对心肌细胞凋亡的影响。方法:(1).建立快速起搏致心衰大鼠模型:将30只290-310g雄性健康SD大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、假手术组和起搏组。正常对照组常规饲养;假手术及起搏组行起搏器及电极植入术,然后假手术组常规饲养;起搏组以550次/分持续快速心室起搏4周。起搏4周后观察实验动物的一般情况,测量大鼠自主心率、体重、心脏质量,超声诊断仪检测动物模型心功能,包括左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末期压(LVESP)及左心室舒张末期压(LVEDP)等。(2)构建miR-499腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体,将后者转染入大鼠体内,通过定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)使miR-499在大鼠体内的表达上调,选择40只290-310g雄性健康SD大鼠随机分为4组:1.假手术,2.假手术+miR-499组,3.起搏+空载体组,4.起搏+MiR-499组。假手术组及起搏组大鼠均行起搏器及电极植入术(步骤同前),其中上调MiR-499的组别(第2、4组)大鼠在右心室心尖部缝合电极后,于左心腔内注射滴度为1×1012vg/mL病毒200μL,同时夹闭主动脉10秒钟。使病毒在心脏收缩的基础上经冠状动脉均匀转染至心肌组织,余操作同前。起搏组(3、4组)术后5天开始间断打开起搏器开关,术后7天开始以550次/分频次快速持续起搏4周,假手术组(1、2组)不进行起搏处理。用qRT-PCR检测大鼠体内miR-499的表达水平,用蛋白质印迹法检测大鼠心衰模型中PDCD4和PACS2的含量,用免疫组化及TUNEL法检测心肌细胞凋亡程度。结果:(1)本实验建立的心衰动物模型均出现活动能力下降、食欲减退、呼吸急促等表现。正常对照组与起搏组相比LVEF分别为83.3%和64.3%(P0.01),LVFS分别为 46.5%和 29.1%(P0.01),LVEDP 分别为 2.4mmHg 和 34.8mmHg(P0.01),自主心率分别377.3次/分和411.6次/分(P0.05),体重分别为502.1g和410.1g(P0.05),心脏质量分别为1.18g和1.64g(P0.01)。(2)快速起搏致心衰大鼠模型及rno-miR-499腺相关病毒载体及空载体构建成功,将后者转染入大鼠体内后模型体内miR-499表达上调。结果表明MiR-499的过表达可使大鼠心衰模型心肌组织中PDCD4和PACS2的表达明显降低(P0.01)。HE染色可见心脏结构重构程度减轻,TUNEL法检测心肌细胞组织凋亡程度减小(P0.01)。同时,快速起搏可致大鼠心脏出现结构重构,心肌组织的凋亡程度增加,但MiR-499的过表达则使其程度减小。结论:(1)本实验成功建立快速起搏致心衰大鼠模型。这种疾病模型可较好的模拟人类慢性心衰机制、心脏结构、血流动力学和一般情况的改变。(2)上调miR-499可降低PDCD4和PACS2的表达,抑制快速起搏所致心衰大鼠心肌细胞的凋亡。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.6
【图文】：

示意图,电极植入,起搏器,大鼠

图１邋ＳＤ大鼠起搏器及电极植入过程示意图逡逑６．术后处理：术后３天在大鼠胸腹部放置防咬圈，断裂，隔日拆卸防咬圈观察；假手术组和起搏组术后每７天；起搏组于术后５天开始间断打开起搏器开关起搏快速起搏（起搏频率为５５０次／分），持续起搏４周。逡逑７．术后观察：逡逑１）观察各组饮食、睡眠、活动、毛发色泽、体重等２）心脏超声检查：停止起搏后，３％戊巴比妥钠４０ｍｇ／ｐｅｒｍｉｎｕｔｅ，ｂｐｍ），用超声心动仪测定左室射血分数（Ｌ（ＬＶＦＳ，％）。逡逑３）采用多道生理信号采集处理系统检测：麻醉下经

对比图,起搏,放大倍数,对比图

■逦■逡逑假手术组（Ｓ组）逦起搏组（Ｐ组）逡逑图３．ａ假手术组及起搏组Ｍａｓｓｏｎ染色纵切面对比图（放大倍数：４００）逡逑ｍｍ逡逑假手术组（Ｓ组）逦起搏组（Ｐ组）逡逑图３．ｂ假手

对比图,起搏,放大倍数,纵切面

图３．ａ假手术组及起搏组Ｍａｓｓｏｎ染色纵切面对比图（放大倍数：４００）逡逑

【参考文献】