血清ATG-7在急性心肌梗死患者中的表达及临床意义

发布时间：2020-07-23 17:06

【摘要】：研究目的:本课题通过定量检测急性心肌梗死患者(实验组)和参加健康体检的心电图正常、无心血管疾病的健康人(对照组)血清自噬相关基因-7(ATG-7)的蛋白表达,并比较血清ATG-7蛋白表达在两组中的差异,分析血清ATG-7蛋白表达量与急性心肌梗死患者的相关性。采用Philips HD11XE彩色多普勒超声诊断仪行心脏多普勒超声检查,测量左室舒张末期内径(Left Ventricular End Diastolic Diameter,LVEDD)和左心室射血分数(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF),探讨血清ATG-7蛋白表达在急性心肌梗死患者临床诊断中的应用价值,及血清ATG-7蛋白表达与急性心肌梗死患者LVEDD和LVEF的关系。研究方法:选取2016年12月至2017年12月青岛大学医学院附属医院心内科诊断并住院治疗的急性心肌梗死患者50例作实验组,并同期选取青岛大学医学院附属医院健康体检中心50例参加健康体检的心电图正常、无心血管疾病的健康人作为对照组。所有入选患者基线资料采集,包括包括姓名、性别、年龄、发病时间、吸烟史、家族史、血常规、凝血功能、血糖血脂、肝肾功及心电图、冠状动脉造影结果,所有入选患者均在D动SA局麻下经桡脉或股动脉路径行冠状动脉造影术明确诊断,根据冠状动脉造影结果行PCI术。所有入选患者采用Philips HD11XE彩色多普勒超声诊断仪行心脏多普勒超声检查诊断,测量左室舒张末期内径和左心室射血分数。测量3次,取平均值。患者入院后在行冠脉造影术前抽取静脉血检测ATG-7蛋白含量,所有数据采用统计学软件SPSS22.0统计软件包进行数据处理。计量资料采用均数标准差(x±s)表示,符合正态分布及方差齐性的组间计量资料比较采用t检验,不符合正态分布和/或方差齐性采用非参数检验。计数资料采用百分数(%)表示;组间计数资料采用x2检验。相关分析采用Pearson直线相关分析(r)表示。以P0.05表示差异具有统计学意义。研究结果:(1)两组受试者的性别、年龄、体重指数、高血压病史、糖尿病史差异均无统计学意义(P0.05),而实验组受试者的血脂异常病史比例显著高于对照组(P0.05),实验组受试者的血清ATG-7蛋白、LVEDD较对照组显著升高,而LVEF较对照组受试者显著降低(P0.05);(2)ST段抬高型心肌梗死患者(STEMI)和非ST段抬高心肌梗死患者(NSTEMI)血清ATG-7水平和心功能指标LVEDD、LVEF差异均无统计学意义(P0.05);(3)不同Killip分级(用于在AMI急性心梗所致的心力衰竭的临床分级)患者血清ATG-7蛋白表达水平和心功能指标LVEDD、LVEF差异具有统计学意义(P0.05),血清ATG-7蛋白表达水平随着Killip分级升高而显著升高(P0.05),LVEDD随着Killip分级升高而显著增大(P0.05),LVEF随着NYHA分级升高而显著减小(P0.05);(4)相关性分析结果显示,血清ATG-7蛋白表达水平与LVEDD呈正相关(P0.05),而与LVEF呈负相关(P0.05)。研究结论:(1)实验结果表明,急性心肌梗死患者组血清ATG-7蛋白水平较健康受试组显著升高,说明ATG-7蛋白是一种潜在的急性心肌梗死临床诊断的标志物。但STEMI和NSTEMI患者之间ATG-7蛋白表达水平无显著差别,说明患者血清中的ATG-7蛋白无法用来区分STEMI和NSTEMI。(2)急性心肌梗死患者心功能Killip分级不同,血清ATG-7蛋白水平也显著不同,随着Killip分级升高而血清ATG-7水平也显著上升,说明ATG-7蛋白是一种临床上区分Killip分级的潜在蛋白标志物。(3)急性心肌梗死患者中血清ATG-7蛋白水平与LVEDD呈正相关,而与LVEF呈负相关。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.22
【图文】：

原理图,自噬,细胞,原理

图 1 细胞自噬的原理自噬相关基因（Autophagy-Related Gene, ATG）即调控自噬的基因，目前在菌种的研究中已发现了 32 种自噬相关基因，所有真核生物体内包括所有哺乳动内均发现有自噬，其自噬相关蛋白质结构相似，仅命名有所不同[17-20]。目前，ATG 基因被发现参与自噬体形成[21]。我们假设 ATG-7 可能是激活基础自噬功能在靶点。ATG-7 在自噬体（autophagosome）生物合成过程中发挥了双重作用。面，做为 E1 样连接酶（E1-like ligase），ATG-7 可以与 ATG-5 和 ATG-12 结合是自噬体形成的关键步骤[22-26]。另一方面，通过添加一个磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine group），ATG-7 将 ATG-8（LC3）从一个不成熟的胞式转化为成熟的自噬体膜蛋白[27-30]。基因敲除 ATG-7 引起自噬缺失，说明 AT自噬功能的关键因子[31-33]。本研究通过定量检测 AMI 病人血清 ATG-7 的表达水平，进一步探讨自噬在中的作用，从而为 AMI临床诊断提供另一种线索和依据。

检测流程,表达水平,血清,蛋白

图 1.1 血清 ATG-7 蛋白（Target Protein）表达水平检测流程具体的 ELISA 方法如图 1.1 所示，把纯化的 ATG-7 抗体包被于酶标板制成固抗体，依次加入处理后的病人血清或 ATG-7 蛋白抗原，然后洗去载体上游离成分加入过氧化物酶标记（Horseradish Peroxidase，HRP）和生物素化的特异性抗原抗的亲和素，制备抗体原- 抗体 - 酶标抗体复合物，洗涤后，加入四甲基联苯（Tetramethylbenzidine，TMB）显色。TMB 与 HRP 发生反应，使显色剂由无色变色，加终止液后最终变为黄色。溶液的颜色和样品中 ATG-7 蛋白浓度呈正相关。用酶标仪读取样品在 450 nm 波长下所测定的各溶液的吸光度，通过利用 ATG-7 蛋标准样品构建的标准曲线计算病人血清 ATG-7 蛋白的浓度。

原理图,原理,四甲基联苯胺,终止液

图 1.1 血清 ATG-7 蛋白（Target Protein）表达水平检测流程具体的 ELISA 方法如图 1.1 所示，把纯化的 ATG-7 抗体包被于酶标板制成固相抗体，依次加入处理后的病人血清或 ATG-7 蛋白抗原，然后洗去载体上游离成分，加入过氧化物酶标记（Horseradish Peroxidase，HRP）和生物素化的特异性抗原抗体的亲和素，制备抗体原- 抗体 - 酶标抗体复合物，洗涤后，加入四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB）显色。TMB 与 HRP 发生反应，使显色剂由无色变蓝色，加终止液后最终变为黄色。溶液的颜色和样品中 ATG-7 蛋白浓度呈正相关。应用酶标仪读取样品在 450 nm 波长下所测定的各溶液的吸光度，通过利用 ATG-7 蛋白标准样品构建的标准曲线计算病人血清 ATG-7 蛋白的浓度。

【参考文献】