硫化氢改善高糖环境下内皮祖细胞功能活性的机制研究

发布时间：2020-08-14 11:39

【摘要】：目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)对高糖环境下内皮祖细胞(EPCs)功能活性的影响及机制研究。方法:采用密度梯度离心法从25-35岁健康志愿者外周血分离出单个核细胞(PBMCs),然后用EGM-2培养基对EPCs进行培养和诱导分化,细胞培养7天后通过用细胞免疫荧光检测EPCs摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)和结合异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素-I(FITC-UEA-I)的特性,鉴定出EPCs;在体外,将EPCs分别随机置于正常葡萄糖培养液(5.5mmol/L)、高糖培养液(33mmol/L)、高糖(33mmol/L)+不同浓度NaHS(H_2S前体)(25μM、50μM、100μM、200μM)培养液中培养24h,然后观察并且比较各组EPCs体外增殖、迁移、黏附能力变化;在体内实验,首先建立裸鼠颈动脉内膜拉脱损伤模型,然后观察高糖对EPCs修复裸鼠颈动脉内皮损伤能力的影响,以及NaHS的保护作用;最后使用蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测NaHS抗高糖环境下内皮祖细胞Akt和eNOS蛋白的表达情况。结果:高糖培养液作用EPCs 24h后,EPCs的增殖、迁移、黏附能力均明显下降(P0.05);而当不同浓度的NaHS和高糖同时作用于EPCs时,细胞的增殖、迁移、黏附能力均得到明显改善(P0.05);当高糖作用EPCs进行细胞移植时,其再内皮化能力明显下降(P0.05),而当硫化氢和高糖同时作用于EPCs进行细胞移植时,其再内皮化能力明显改善(P0.05),且EPCs表面的Akt/eNOS信号通路明显上调(P0.05)。结论:1.NaHS(H_2S前体)在一定范围内能够明显改善高糖环境下内皮祖细胞(EPCs)的增殖、迁移、黏附能力,并且能改善内皮祖细胞的血管内皮修复能力。2.外源性硫化氢(H_2S)改善内皮祖细胞(EPCs)的血管内皮修复能力的机制可能与内皮祖细胞表面的Akt/eNOS信号通路相关。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R54
【图文】：

光镜,图片,双染色,贴壁细胞

第 3 章结果第 3 章结果的鉴定倒置显微镜观察形态：培养 7 天后的 EPCs 贴壁细胞呈现），培养 7 天后的 EPCs，用 DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I疫荧光显微镜下观察细胞摄取 DiI-ac-LDL 呈现红色-I 呈现绿色荧光，DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I 双染色阳性以被认为是正在分化的 EPCs（图 2）。

双染色,贴壁细胞,倒置显微镜,光镜

倒置显微镜观察形态：培养 7 天后的 EPCs 贴壁细胞呈现1），培养 7 天后的 EPCs，用 DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I免疫荧光显微镜下观察细胞摄取 DiI-ac-LDL 呈现红色-I 呈现绿色荧光，DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I 双染色阳性以被认为是正在分化的 EPCs（图 2）。图 1.培养 7 天的 EPCs 光镜下图片（100x）

体外增殖,糖浓度,保护作用,葡萄糖

第 3 章结果EPCs 体外增殖能力用 CCK8 法检测在高糖环境下，NaHS 对 EPCs 的保护作用；与正常比，高糖组的 EPCs 增殖能力明显降低(P<0.05）。25μM、50μM、00μM NaHS 作用后 EPCs 的增殖能力呈剂量依赖性升高（P<0.05）压对照组与 5.5mmol/L 葡萄糖组相比无显著差异（P>0.05）。

【参考文献】