血浆NGAL水平与冠心病及其病变严重程度的相关性研究

发布时间：2020-09-22 12:50

【摘要】：目的:本研究旨在比较血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和白介素(IL)-1β在无肾脏异常的不同冠状动脉疾病病人中的差异,以及评价这些标志物与患者冠状动脉狭窄严重性的关系。方法:本研究纳入符合纳入标准的入选者共365例,均行冠状动脉造影。包括124例ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)病人、117例稳定性心绞痛(SAP)病人和124例冠状动脉没有明显狭窄的病人。采用酶联免疫吸附法检测患者血NGAL、MMP-9、hs-CRP和IL-1β的量。并将STEMI和SAP患者归为冠心病(CHD)组并根据SYNTAX积分分成:高积分亚组(SYNTAX积分≥33,n=29)和低积分亚组(SYNTAX积分33,n=212)比较组间差异。采用Spearman分析检验上述标志物间及其与冠状动脉狭窄严重程度的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)检测上述血浆标志物水平辅助识别严重冠状动脉狭窄的能力,进一步采用logistic回归评价影响SYNTAX积分的指标。结果:STEMI组患者血浆NGAL、MMP-9、hs-CRP浓度分别高于SAP组和对照组患者(P均0.05),SAP组患者血浆NGAL和hs-CRP浓度高于对照组(P均0.05)。血浆IL-1β水平在各组间无明显差别(P均0.05)。CHD组患者冠脉SYNTAX积分与患者血浆NGAL(r=0.363,P=0.000)、MMP-9(r=0.377,P=0.000)、hs-CRP(r=0.163,P0.011)浓度均呈正相关,但SYNTAX积分与患者血浆IL-1β浓度没有相关性(r=-0.043,P=0.510)。CHD组患者血浆NGAL浓度与MMP-9(r=0.601,P=0.000)、IL-1β(r=0.159,P=0.014)浓度呈正相关。关于识别高SYNTAX积分的ROC曲线下面积(AUC)血浆NGAL(AUC=0.838,95%Cl:0.752-0.923,P=0.000)大于MMP-9(AUC=0.818,95%Cl:0.724-0.912,P=0.000)、IL-1β(AUC=0.485,95%Cl:0.369-0.601,P=0.791)和hs-CRP(AUC=0.607,95%Cl:0.492-0.722,P=0.061)。多因素logistic回归显示患者NGAL浓度与高SYNTAX积分独立相关(OR=1.109,95%Cl:1.104-1.114;P=0.000)。结论:STEMI病人血浆NGAL、MMP-9、hs-CRP浓度显著高于SAP组和对照组病人。CHD病人血浆NGAL量与MMP-9、IL-1β浓度及冠状动脉狭窄严重性呈正相关。在识别严重冠状动脉狭窄的CHD患者能力方面NGAL优于MMP-9、IL-1β和hs-CRP。且血浆NGAL是CHD患者高SYNTAX评分的独立影响因素。NGAL有助于筛选高危的CHD病人。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4
【图文】：

图 2-1 NGAL 标注品的配置示意图（4）洗涤工作液的配制：先根据实验所需计算出洗涤工作液应该配制的量，用量筒往大烧杯内加入 480ml（分两次）去离子水，再用移液枪向烧杯内量取20ml 洗涤工作液混匀，配成按 1:25 倍稀释的工作液备用。要注意的是刚取出的浓洗涤液在低温保存后会有盐析出，所以在配制工作液的时候要确保其已经达到室温，如果还是存在结晶可以在水浴中加温帮助其溶解。（5）生物素标记抗体工作液的制备：先将制备所需的体系在小离心机上短时间离心，根据实验所需往一洁净试管内分别滴进 10ul 生物素标记抗体和990ul 生物素标记抗体稀释液并充分混合，制备成所需的 1:100 的工作液备用。在使用前 10 分钟内配好。（6）辣根过氧化物酶标记亲和素工作液的制备：先将制备所需的体系在小离心机上短时间离心，根据实验所需用移液器往一洁净试管内分别加 10ul HRP和 990ul HRP 稀释液并充分混匀，制备成所需的 1:100 的工作液备用。在使用前10 分钟内配好。

兰州大学硕士研究生学位论文 血浆 NGAL 水平与冠心病及其病变严重程度的相关性研究吸取 15ul 上述的混合液体加进 285ul 样本稀释液（1:20）中再次用移液器轻柔混合避免气泡。混合成按 1:100 倍稀释后的血样备用。（3）标准品的配制：当实验开始前将实验体系由 4℃冰箱移出放在常温30min，待温度到达至室温后从中拿一支标准品，先用 6000-10000rpm 离心 30s。向标准品中滴进 1ml 的样本稀释液，用实验用枪轻柔混合避免气泡，再用迷你离心机短时间离心确保混匀，得到最高浓度的标准品 S7。提前准备 7 个 1.5ml离心管用记号笔分别标注 S0-S6 按顺序在实验台上排开，在 S0-S6 中均加250ul 的样本稀释液，之后从 S7 中用移液器往 S6 中加进 250ul 液体并轻柔混合避免产生气泡，再从 S6 中用移液枪往 S5 中加进 250ul 液体同样用实验用枪轻柔混合并避免气泡，按上述方法顺序完成 S4、S3、S2、S1 的加样。S1 不往 S0中加样，S0 做空白对照。（如下图 2-2 所示）

光度（OD 值），通过得出的 OD 值在专业软件中构建出方程后得出 IL-1β 的含量。（2）样本的稀释：根据以往研究的经验和与试剂公司技术人员沟通，决定按照说明书上进行实验样本不稀释，用原液。在实验前一晚将血浆标本从-80℃冰箱移放入实验室 4℃冰箱过夜，试验当天把血标本从 4℃冰箱移出放在常温30min，以平衡至室温，待测，要注意所有血样均不能反复冻融。（3）标准品的配制：当实验开始前将实验体系由 4℃冰箱移出放在常温30min，待温度到达至室温后从中拿一支标准品，先用 6000-10000rpm 离心 30s。向标准品中滴进 1ml 的样本稀释液，用移液器轻柔混合并避免气泡，再用小心机短时间离心确保混合，得到最高浓度的标准品 S7。提前准备 7 个 1.5ml 离心管用记号笔分别标注 S0-S6 按顺序在实验台上排开，在 S0-S6 中均加 250ul 的样本稀释液，之后从 S7 中用移液器往 S6 中加进 250ul 液体并轻柔混合避免产生气泡，再从 S6 中用移液枪往 S5 中加进 250ul 液体同样用实验用枪轻柔混合并避免气泡，按上述方法顺序完成 S4、S3、S2、S1 的加样。S1 不往 S0 中加样，S0 做空白对照。（如下图 2-3 所示）

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本文编号：2824409