地西他滨对骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞生物学特点影响的研究

发布时间：2020-09-29 07:32

　　 越来越多的研究表明骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)MDS是造血干细胞和骨髓微环境均存在异常的一组肿瘤性疾病。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是构成骨髓微环境中的关键细胞。虽然动物实验表明骨髓MSC中的原发异常可以导致造血干细胞DNA出现损伤和MDS样病态造血,但关于MDS患者来源的MSC生物学特点的研究的比较少,并且研究结果并不完全一致。因此,本研究对MDS来源的MSC的功能特点及其在地西他滨作用下的变化进行了研究。研究方法:收集了40例就诊于广东省人民医院未经治疗的新诊断的MDS患者和17例营养性贫血患者的骨髓标本。体外培养并鉴定MSC,在适当条件下诱导MSC向成骨细胞分化通过茜素红染色观察钙结节形成情况;通过成纤维细胞集落形成单位实验评估MSC的克隆形成潜能、根据公式计算MSC的增殖能力、MTT实验测定MSC的增殖曲线;通过实时定量PCR分析MSC中的基因表达、流式细胞术分析MSC的细胞周期、凋亡特点。分析地西他滨对MDS来源的MSC的增殖、细胞周期、凋亡和基因表达的影响。通过MDS来源的MSC与外周血单个核细胞体外共培养,应用流式细胞术分析地西他滨对MDS来源的MSC诱导活化T细胞分化为调节T细胞的影响。结果:所有对照组MSC均能实现体外生长,40例MDS患者中有9例患者的MSC不能在体外实现增殖。对照组均呈现纤细的纤维样外观,而MDS来源的MSC多呈现扁平、多角形外观,体积较对照组大。MDS来源的MSC的克隆形成能力、增殖能力低于对于对照组。MDS来源的MSC诱导分化后形成的钙结节数量、分化前调节成骨分化转录因子表达水平低于对照组。MDS来源的MSC中参与调控造血干细胞向MDS、AML转化有关的Dicer1和Jagged-1的基因表达升高。MDS来源的MSC在G0/G1期的细胞比例高于对照组,而S期的细胞比例低于对照组(P0.05)。MDS来源的MSC中早期凋亡细胞明显高于对照组(P0.05)。地西他滨(0.25μM)对MDS来源的MSC的增殖和凋亡能力没有明显影响,但能够改变MDS来源的MSC的细胞周期分布,降低G0/G1细胞比例的同时增加了G2/M比例。地西他滨能够削弱MDS来源的MSC诱导活化的T细胞分化为Tregs的能力,并且降低MDS来源的MSC中免疫抑制分子PD-L1的表达。结论:MDS来源的MSC的生物学特点发生改变,表现的细胞体积增大,增殖能力下降,大部分细胞停滞GO/G1期、早期凋亡细胞比例增加、MDS来源的MSC的成骨分化能力下降,参与调控造血干细胞向MDS转化的Dicer1和Jagged-1的基因表达升高。地西他滨能够部分改变MDS来源的MSC的生物学特点,降低了MDS来源的MSC在G0/G1期的比例,削弱了MDS来源的MSC诱导活化的T细胞分化为Tregs的能力,降低了MDS来源的MSC中免疫抑制分子PD-L1的表达。因此,MDS来源的MSC的功能改变可能在MDS疾病进展中发挥了重要作用,并可能成为潜在的治疗靶点。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R551.3
【部分图文】：

逦ＣＤ４５邋ＦＪＴＣ－Ａ逦Ｃ０Ｊ４邋ＦＩＴＣ－Ａ逡逑图１－２邋ＭＳＣ的的表面抗原淡蓝色代表的阴性对照组，红色代表的对照组或ＭＤＳ的表达。逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｈｉｓｔｏｇｒａｍｓ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｎ．邋Ｌｉｇｈｔ邋ｂｌｕｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎ

逑ｍｕ逡逑图１－１邋ＭＳＣ的形态特点。虽然ＭＤＳ来源的ＭＳＣ与对照组ＭＳＣ均表现为纤维样外观，但是ＭＤＳ逡逑来源的ＭＳＣ体积增大，多呈现多角形外观。（Ａ）为对照组ＭＳＣ，（Ｂ）邋ＭＤＳ来源的ＭＳＣ。逡逑（比例尺代表１００ｍｍ）逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ａｌｔｈｏｕｇｈ邋ｂｏｔｈ邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ａｎｄ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｄｉｓｐｌａｙｅｄ邋ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ逡逑ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，邋ｔｈｅ邋ｍｏｓｔ邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｌａｒｇｅｒ邋ａｎｄ邋ｐｏｌｙｇｏｎａｌ邋ｓｈａｐｅ．邋（Ａ）邋ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑ｇｒｏｕｐ邋（Ｂ）邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｇｒｏｕｐ．邋（Ｓｃａｌｅ邋ｂａｒｓ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋１００邋ｍｍ）逡逑ｌｌｉｄｂｒ邋ｉＬｋ：．邋ｌｉＪｔＭ逡逑＜0＜逦逦ｉｏ＞逦ｉｂ＊逦＂ｔ（ｆ邋＂逦＂Ｏ＇逦ｉｏ＊逦ｗ逦？0＇逦ｔｏ＊逦ｉｏ１逦ｉｏ＊逦ｉｏ？逡逑Ｃ０１６６邋ＰＣ－Ａ逦＾逦Ｃ０１０５Ｐ￡－Ａ＿逦你逦ＣＤ９０邋Ｆ１ＴＣ－Ａ逡逑ｒ逦0？邋ｒ邋ｋ逡逑３ｍ？．ｉ逦＇邋Ｊ１００；逦Ｉ逦—逦１邋Ｊ＇？逦卜逦１逡逑Ｉｎ

本文编号：2829426