心衰大鼠心肌细胞凋亡JNK的调控作用及Hexarelin对其影响

发布时间：2020-09-30 18:26

　　目的:心力衰竭(heart failure,HF),是多种心脏疾病发展的最后阶段,HF有多种病因。心肌细胞凋亡是HF发展的要素。本实验主要探讨HF大鼠心肌组织中,JNK磷酸化激活后,对促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2进行调节,从而对心肌细胞凋亡产生影响;探讨海沙瑞林(hexarelin)是否可以通过抑制JNK信号通路,减少心肌细胞凋亡的数量,改善HF。方法:清洁级,SD大白鼠80只,体重(220?20g)。分为四组:正常组,假手术组,HF组和HF+hexarelin组。我们用左冠状动脉前降支结扎法,制造心肌梗死后HF模型,术中行心电监测。术后4周分别给予生理盐水或hexarelin(25μg/kg,每天1次),持续注射4周。手术8周之后用超声心动图检测各组大鼠的心功能;HE染色法,察看心肌细胞的形态;免疫组化法测量大鼠心肌组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白阳性表达的水平;Western Blot法分别测定各组大鼠心肌组织中JNK、p-JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达量。结果:1.心电图结果术前,大鼠心电图各波形均正常。手术结束后,假手术组部分大鼠出现一过性心律失常。模型组大鼠T波高耸,且ST段呈直立性抬高。2.超声心动图结果术后8周末,行超声心动图检测,大鼠左心室扩张,与正常组相比,HF组的左室收缩期内径、左室舒张期内径均显著增大(p0.05),左室射血分数明显减小(p0.05)。与HF组相比较,HF+hexarelin组左室收缩期内径,及左室舒张期内径与模型组相比明显变小(p0.05),且左室射血分数显著增加(p0.05)。3.HE染色结果正常组、假手术组的心肌细胞:排列均整齐,走向规律一致,心肌纤维横纹清晰可见。且染色均匀,心肌细胞核形状规则。HF组显示受损的心肌细胞有大量坏死,心肌细胞排列紊乱,心肌横纹消失。HF+hexarelin组的心肌细胞排列比较规律,部分心肌纤维仍可见横纹。4.免疫组化结果p-JNK蛋白阳性表达水平:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。Bax蛋白阳性表达水平:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。Bcl-2蛋白阳性表达水平:模型组较正常组与假手术组相比明显降低(p0.05),治疗组较模型组相比明显升高(p0.05)。Casepase-3蛋白阳性表达水平:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。5.Western Blot检测结果p-JNK/JNK的比值:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。Bax蛋白表达量:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。Bcl-2蛋白表达量:模型组较正常组与假手术组相比明显降低(p0.05),治疗组较模型组相比明显升高(p0.05)。Cleaved Casepase-3/Caspase-3的比值:模型组较正常组与假手术组相比明显升高(p0.05),治疗组较模型组相比明显降低(p0.05)。结论:结果表明hexarelin通过抑制JNK信号通路,抑制了Bax的蛋白表达、增加Bcl-2的蛋白表达、抑制Caspase-3活化,从而减少心肌细胞凋亡,是改善梗死后心力衰竭大鼠心功能的途径之一。
【学位单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R541.6
【部分图文】：

外源性,内源性,途径,箭头

佳木斯大学硕士学位论文心肌细胞凋亡的过程主要包括两种途径（图 2）：内源性途径/线粒体途，及外源性途径/死亡受体途径。其中胚胎发育时主要启动的是外源性细胞凋途径，例如胚胎发育时期，手指和脚趾指蹼的逐渐消失；小蝌蚪变成青蛙的程中会褪掉尾巴，也属于外源性凋亡途径的实例。而在成人以后很多细胞凋则是通过内源性凋亡途。例如，细胞由于缺乏氧气，缺养分以及病毒感染，NA 损伤等因素而导致的细胞凋亡，都是通过内源性凋亡途径完成的[27]。

三维结构图

Fig. 3 The structure of JNKs图 3 JNK 的三维结构图JNK 蛋白的通用结构用米色的条带表示，可变区域（选择性剪接亚型和紫色表示。激酶结构域的催化位点 ATP，用黄色表示。无序区域用K 的三级激酶模式K 是一组三级磷酸化依赖的激酶，分别是 MAPKKK(MAP kiMEKK), MAPKK(MAP kinase kinase/MEK)和 MAPK 家族中的应就好像是磷酸化的接力赛。MAPKKK 磷酸化激活 MAPKK激活 MAPK 家族中的 JNK[45]（图 4 ）。

模式图,信号通路,模式图,氨基末端

Fig. 4 JNK signaling modules图 4 JNK 信号通路模式图种能够激活 JNK 的 MAPKKK，包括 MEKK 组成员（蛋白激酶组（MLK1，MLK2，MLK3，DLK 和 LZK），K2），TAK1 和 TPL2。已经鉴定了具有不同氨基末端激酶，并且已经描述了具有不同氨基末端和羧基末端酶同种型。它们都通过苏氨酸和酪氨酸两个氨基酸的双路的激活物K 被许多细胞外信号激活后介导信号从细胞膜传导入号刺激包括 UV 辐射，反应活性氧(reactive oxygen，病原体，生长因子，毒性化合物，形态发生因子，应

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