MPPa介导光动力调控小鼠巨噬细胞凋亡及炎症反应的实验研究

发布时间：2020-10-11 23:47

　　 目的:探讨焦脱镁叶绿酸甲酯(Pyropheophorbide-αmethyl ester,MPPa)介导的光动力(Photodynamic therapy,PDT)治疗对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡及炎症反应的作用,为PDT应用于动脉粥样硬化的治疗提供实验依据。方法:流式细胞术检测RAW264.7细胞对MPPa的摄取;激光扫描共聚焦显微镜观察MPPa在细胞内的亚器官定位;CCK-8检测细胞毒性;DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)的产生;流式细胞术和Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位的变化;ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6分泌情况;Western Blot检测Caspase-3、cleaved caspase-3、procaspase-9、cleaved caspase-9、PARP、cleaved PARP、bcl-2、Bax、NF-κB p-p65、p-IKKα/β、和p-IκBα;免疫荧光观察NF-κB p65核转录情况。结果:MPPa主要聚集于线粒体;MPPa-PDT以剂量依赖的方式影响细胞的存活率;诱导细胞产生大量ROS并诱导细胞凋亡;降低细胞线粒体膜电位;上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达;MPPa-PDT下调LPS诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平;下调LPS诱导的NF-κB p-p65、p-IKKα/β、和p-IκBα蛋白表达并抑制NF-κB p65的核转录。结论:MPPa-PDT诱导RAW264.7细胞凋亡并抑制LPS诱导的炎症反应,可能为PDT治疗动脉粥样硬化提供实验依据。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R543.5
【部分图文】：

图 2. MPPa-PDT 对 RAW264.7 细胞存活率的影响。（a）单纯使用 MPPa 时对细胞存活率的影响；（b）单纯光照时对细胞存活率的影响；（c）MPPa-PDT（2 μmol/L）和/或 LPS 对细胞存活率的影响。Fig 2. Effect of MPPa-PDT on RAW264.7 cell viability. Effect of 0, 0.5, 1, 2,and 4 mol/L MPPa on RAW264.7 macrophage viability（a）. Effect of variousirradiation energy densities on RAW264.7 macrophage viability (b).*P＜0.05 vs.control group. Effect of MPPa-PDT on RAW264.7 macrophage viability. Followingthe incubation with MPPa at 2 μmol/L for 12 h, each cell was irradiated withdifferent energies in presence or absence of LPS, such as 0, 0.3, 0.6, 0.9,1.2, 1.5, and 1.8 J/cm2. Cell viabilities were detected by CCK-8 assay（c）.(*P＜0.05 vs. control group).2.3 MPPa-PDT 诱导 RAW264.7 细胞内产生 ROS

图 3 MPPa-PDT 对细胞内 ROS 的影响。Fig 3: Effect of MPPa-PDT on ROS formation in RAW264.7 macrophages. (*P＜0vs. control group,#P＜0.05 vs. LPS group).2.4 MPPa-PDT 诱导 RAW264.7 细胞凋亡如图 4 所示，MPPa-PDT 组（12.960±2.779）和 LPS+MPPa-PDT 组（14.240±2.689）凋亡率分别高于对照组（5.967±2.189）和 LPS 组（5.567±1.811）（P＜0.05），对照组和 LPS 组、MPPa-PDT 组和 LPS+MPPPDT 组之间差异没有统计学意义（P＞0.05），说明 MPPa-PDT 可以诱导RAW264.7 细胞凋亡。

图 3 MPPa-PDT 对细胞内 ROS 的影响。Fig 3: Effect of MPPa-PDT on ROS formation in RAW264.7 macrophages. (*vs. control group,#P＜0.05 vs. LPS group).2.4 MPPa-PDT 诱导 RAW264.7 细胞凋亡如图 4 所示，MPPa-PDT 组（12.960±2.779）和 LPS+MPPa-PDT 组（14.240±2.689）凋亡率分别高于对照组（5.967±2.189）和 LPS 组（5.567±1.811）（P＜0.05），对照组和 LPS 组、MPPa-PDT 组和 LPS+PDT 组之间差异没有统计学意义（P＞0.05），说明 MPPa-PDT 可以诱导RAW264.7 细胞凋亡。
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本文编号：2837303