EPO在缺铁性贫血大鼠GH-IGF-1轴中的作用研究

发布时间：2020-10-12 20:10

　　 目的:探讨缺铁性贫血时,升高的EPO是否通过激活下游的信号分子AKT来调节GH-IGF-1轴,在影响机体体重和生长发育中发挥作用。方法:1.制备缺铁性贫血大鼠模型:3周龄雌性Wistar大鼠36只分两组,分别饲养低铁饲料和含铁饲料,称量体重。2周后鉴定贫血模型:大鼠内眦静脉采血,全自动血液分析仪检测大鼠血红蛋白(Hb)、红细胞分布宽度(RDW)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和红细胞比容(Hct)。2.重组人促红细胞生成素(r Hu EPO)干预:按5000IU/kg剂量r Hu EPO或等量生理盐水,采用腹腔一次性注射方法,对实验组和对照组大鼠进行干预。3.大鼠肝脏HE染色。4.免疫组织化学方法检测实验组大鼠r Hu EPO干预后肝脏IGF-1表达。5.ELISA试验检测大鼠r Hu EPO干预后血清中GH、IGF-1含量。6.Westen blot检测大鼠r Hu EPO干预后肝脏促红细胞生成素受体(EPOR)、总蛋白激酶B(t-AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白水平。结果:1.成功制备缺铁性贫血大鼠模型:与对照组相比,实验组大鼠Hb、MCV、MCH、Hct均明显下降(P0.01);RDW值升高(P0.01);实验组大鼠低铁饲养2周后体重较对照组低(P0.05)。2.与对照组相比,实验组大鼠肝脏HE染色发现肝细胞肿胀,胞质内出现空泡,部分细胞核固缩,细胞凋亡。3.免疫组织化学检测发现,实验组大鼠r Hu EPO干预后,肝细胞胞浆中IGF-1阳性表达的细胞数目明显下降。4.实验大鼠注射r Hu EPO后,血清GH水平下降(P0.05),IGF-1水平降低明显(P0.01);对照组大鼠r Hu EPO干预后血清GH、IGF-1水平未见差异(P0.05)。5.Westen blot结果显示,实验组大鼠肝脏EPOR蛋白表达量比对照组高(P0.01);实验组和对照组大鼠注射r Hu EPO后,EPOR均有升高趋势,但未见明显差异(P0.05);注射r Hu EPO后肝脏t-AKT蛋白水平没有差异(P0.05),p-AKT蛋白水平增加(P0.05)。结论:1.铁缺乏会导致肝细胞损伤。2.缺铁性贫血大鼠EPOR表达升高,注射EPO后短期内未见EPOR表达改变。3.缺铁性贫血个体GH、IGF-1下调,体重下降,生长缓慢,EPO可能参与部分调控,活化的AKT信号可能是其重要分子机制。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R556.3
【部分图文】：

可见部分细胞核碎片和核固缩，核质聚集，细胞凋亡。可能是缺铁导致肝细胞形态结构发生改变。图1 大鼠肝脏HE染色(×400)Figure 1. HE staining of rats’liver(×400)注：A:实验-EPO组；B:实验-saline组；C:对照-EPO组；D:对照saline组

X 轴与 Y 轴的相关性较大，保证了由该曲线及其方程求出的样本浓度具有较强可信性。图3 标准曲线绘图Figure 3. Standard curve plot注：a: GH标准曲线；b:IGF-1标准曲线

IGF-1 阳性表达细胞，实验组大鼠中，与 saline 干预相比，rHuEPO 干预后大鼠肝细胞胞浆中 IGF-1 阳性表达细胞数目明显下降（图 2）。图2 实验组大鼠肝脏IGF-1免疫组织化学染色Figure 2. Immunohistochemical staining of rats’liver IGF-1 in the experience group(×400)注：EPO：实验-EPO组；NS：实验-saline组2.2 酶联免疫吸附试验检测大鼠血清 GH、IGF-1 水平2.2.1 标准曲线绘制检测大鼠血清中 GH、IGF-1 浓度水平时，根据不同浓度的标准品绘制标准曲线，四参数 Logistic 曲线拟合后，GH 标准曲线如图 3-a 示，回归方程为 y = (3.46783 - 0.12193)/ [1 + (x/3077.39328)^ -0.88577] + 0.12193，r2=0.99901。IGF-1 标准曲线如图 3-b 示，回归方程为 y = (1.30322 - 0.09816) / [1 + (x/570.06162)^ -1.59600] + 0.09816，r2=0.99262。X 轴与 Y 轴的相关性较大，保证了由该曲线及其方程求出的样本浓度具有较强可信性。图3 标准曲线绘图Figure 3. Standard curve plot注：a: GH标准曲线；b:IGF-1标准曲线
【参考文献】

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本文编号：2838217