大鼠主动脉内皮球囊损伤后Apelin的表达变化及缬沙坦对其变化的影响

发布时间：2020-10-20 19:54

　　 目的通过观察大鼠主动脉球囊损伤后血管内膜增生过程中Apelin的表达变化及应用缬沙坦治疗后对其表达的影响,探讨缬沙坦在预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄中的作用及其作用机制,从分子水平为PCI术后再狭窄的预防提供新的研究方向。方法将58只清洁级、体质量在300-350g之间的健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=18)、手术组(n=20)及药物组(n=20)。术前适应性饲养大鼠1周,并于术前12小时开始禁饮食。为预防手术感染,从术前1天至术后3天,给予大鼠腹腔注射青霉素10万单位/只/天。手术组:经腹腔注射10%的水合氯醛(3 ml/kg)将大鼠全身麻醉,从大鼠的左侧颈总动脉插入自制的2F球囊导管,并缓慢行至腹主动脉下端,以0.08~0.10 ml生理盐水充盈球囊,从不同方向反复抽拉导管3次,充分剥脱大鼠主动脉内膜,并于术前1天至术后14天或28天给予等剂量生理盐水灌胃。药物组:手术方法与手术组相同,并于术前1天至术后14天或28天给予缬沙坦20mg/kg/d(溶于等剂量生理盐水中)进行灌胃,直至取标本。对照组:除不插入球囊导管进行主动脉内皮损伤外,其他均与手术组相同。各组大鼠分别于术后14天、28天在无菌条件下取长约5cm的主动脉血管段,在近主动脉弓端剪取5mm用10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,剩余血管段清洗干净后放入无菌无RNA酶的EP管,-80℃冰箱冻存备用。石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察血管内膜增生的情况,并通过Simple PCI图形分析系统测量主动脉内膜、中膜的厚度,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测主动脉组织中Apelin的相对表达水平,采用免疫组织化学法检测主动脉组织中Apelin蛋白的表达水平,并借助Simple PCI图形分析软件以平均光密度值表示该蛋白的相对含量。借助SPSS20.0统计软件进行统计学分析,计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,多样本采用单因素方差分析,而组间两两比较采用LSD-t检验,以P0.05表示差异具有统计学意义。结果(1)术后14天及28天手术组大鼠主动脉内膜较对照组显著增厚(P均0.05),药物组内膜增生程度较手术组明显减轻(P均0.05);(2)术后14天及28天,手术组大鼠主动脉血管组织中Apelin mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高(P均0.05),药物组Apelin mRNA和蛋白表达水平较手术组进一步升高(P均0.05)。结论(1)大鼠主动脉内皮球囊损伤后内膜增生明显,同时血管组织中Apelin表达水平明显升高,提示Apelin可能参与了术后再狭窄的过程;(2)应用缬沙坦干预后,内膜增生的程度明显减轻,同时Apelin表达水平进一步升高,提示缬沙坦抑制术后再狭窄的发生,其作用机制可能与其上调血管组织中Apelin的表达有关。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R54
【部分图文】：

第 3 章 实验结果3.1 动物造模完成情况手术组和药物组均有 2 只大鼠死于术中或术后感染，术后存活 54 只，各组分别于术后 14 天和 28 天取主动脉组织，各组各时间点均有 9 只大鼠。3.2 组织学检测术后 14 天及 28 天，手术组内膜较对照组显著增厚（P 均<0.05)。手术组：术后 14 天内膜中可见大量的平滑肌细胞增殖，内膜和中膜均增厚，但以内膜增厚更明显；术后 28 天，平滑肌细胞的增殖作用减轻，细胞外基质明显增加，内膜进一步增厚。与手术组相比，药物组术后 14 天及 28 天，平滑肌细胞增殖能力减弱，细胞外基质分泌减少，内膜增生减轻（P 均<0.05)，见图 3.1 及表 3.1。

图 3.2 术后 14 及 28 天大鼠主动脉组织 Apelin 免疫组化染色(×400)注：A、B、C 分别为术后 14 天的对照组、手术组、药物组；D、E、F 分别为术后 28 天的对照组、手术组、药物组表 3.3 主动脉血管组织中 Apelin 蛋白的表达水平（ X±s，n=9 )注：与对照组比较，a 为 P<0.05 ；与手术组比较，b 为 P<0.05组别 术后 14 天 术后 28 天对照组 0.163±0.011 0.157±0.013手术组 0.317±0.024a0.361±0.018a药物组 0.583±0.019b0.536±0.021b
【参考文献】

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本文编号：2849091