乙醛脱氢酶2对腹主动脉瘤发生发展的影响及机制研究

发布时间：2020-11-11 05:40

　　 研究背景腹主动脉瘤(Abdominal aortic aneurysm,AAA)是一种具有高致死危险的腹主动脉局部扩张性疾病,一旦瘤体破裂,患者死亡率超过80%。现今动脉瘤的患病率仍在持续上升,但其形成机制仍不清楚;目前主要治疗手段以外科手术为主,内科药物干预方法非常有限。研究发现,中膜平滑肌细胞数目的减少及其收缩功能的降低,是瘤体形成过程中的重要病理机制。然而,上述分子调节机制及可能的干预靶点仍有待进一步阐明。我们的前期临床研究结果提示乙醛脱氢酶2(Aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)与动脉瘤的发生发展关系十分密切,可影响血管平滑肌细胞的表型转化,在此基础上,我们进一步利用动脉瘤动物模型,深入研究了ALDH2影响动脉瘤发生发展的病理机制及干预靶点。研究目的(1)探讨ALDH2是否影响ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤的发生和发展(2)探讨ALDH2影响腹主动脉瘤发生发展的相关分子机制(3)研究影响动脉瘤发生的潜在干预措施研究方法一、体内(动物学)实验1.建立ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤模型:将血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,ANGⅡ,1.44 mg/kg/d)溶于生理盐水(Normal saline,NS)装入渗透泵中并埋入ApoE-/-小鼠体内,持续泵入28天后建立AAA小鼠模型。2.ALDH2的干预措施:腹腔注射ALDH2特异性抑制剂(Daidzin,75 mg/kg/d),小鼠随机分组:DMSO假手术组;Daidzin假手术组;ANGⅡ+DMSO 组;ANGⅡ+Daidzin 组;3.建立心肌素(myocardin,Myocd)干扰小鼠腹主动脉瘤模型(1)尾静脉注射携带有Myocd-shRNA或空载体的腺相关病毒亚型2(Adeno-associated virus2,AAV2),构建Myocd干扰或对照小鼠模型,蛋白印迹法检测小鼠血管组织中的Myocd水平;(2)按照上述方法构建小鼠腹主动脉瘤模型,应用ApoE-/-小鼠,及双敲小鼠(ALDH2-/-ApoE-/-Double knock out,DKO),分组为:ApoE-/-+NC组,ApoE-/-+shRNA组,DKO+shRNA组;4.利用小鼠超声成像技术检测各组小鼠腹主动脉直径;5.VG染色检测小鼠血管弹力纤维变化;6.HE染色观察小鼠血管大体形态变化;7.利用RT-PCR和蛋白印迹法检测小鼠血管平滑肌细胞标志蛋白及Myocd表达;8.免疫组织化学法检测小鼠血管平滑肌细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)变化;二、体外(细胞学)实验1.人原代平滑肌细胞给予ANGⅡ刺激,同时给予Daidzin干预,分组为NS+DMSO组,AGNⅡ+DMSO组,ANGⅡ+Daidzin组;2.ALDH2野生型小鼠主动脉提取原代血管平滑肌细胞并给予ANGⅡ刺激,同时给予miR-31-5p Mimic干预,分组为DMSO+Mimic组,Daidzin+Mimic组,DMSO+Mimic nc组,Daidzin+Mimic nc组;3.ALDH2野生型和ALDH2敲除(Knock out,KO)小鼠主动脉提取原代血管平滑肌细胞并给予ANGⅡ刺激,对照组给予生理盐水(Normal saline,NS),分组为WT+NS组,KO+NS组,WT+ANGⅡ组,KO+ANGⅡ组;4.利用RT-PCR与蛋白印迹法分别检测小鼠血管平滑肌细胞标志蛋白及心肌素表达情况;研究结果1.抑制乙醛脱氢酶2活性可以减少腹主动脉瘤的发生;2.抑制乙醛脱氢酶2活性可通过增加心肌素的表达水平维持平滑肌细胞的收缩功能;3.乙醛脱氢酶2可通过miR-31-5p影响心肌素的表达进而影响平滑肌细胞表型转化和AAA的发生。研究结论ALDH2在腹主动脉瘤的发生发展中起重要作用。抑制ALDH2的活性通过抑制miR-31-5p增加心肌素的表达调节血管平滑肌细胞表型转化,抑制平滑肌细胞受到AngⅡ刺激后向分泌型转化,维持血管的收缩性和完整性,从而减少腹主动脉瘤的发生发展。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R543.1
【部分图文】：

图１．抑制乙酸脱氢酶２活性可以减轻血管紧张素２导致的血管扩张??（Ａ、Ｂ）利用小鼠无创血压计测量小鼠放泵前安静时血压，各组没有统计学差??异；（Ｃ）利用小动物超声仪测量小鼠放泵前腹主动脉直径，各组没有统计学差??异；（Ｄ、Ｅ）利用小鼠无创血压计测量小鼠放泵后２８天安静时血压［＊Ｐ＜０．０５ｖｓ．??ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＾＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ］；?（Ｆ）利用小动物超声仪测量小鼠放泵后??２８?天腹主动脉直径［＊尸＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＃尸＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

图２．抑制乙醛脱氣酶２活性可以减少腹主动脉瘤的发生率??（Ａ）相机拍摄小鼠血管大体图片，红色突出处为瘤体；（Ｂ）小鼠腹主动脉瘤统??计ＮＳ＋ＤＭＳＯ组?０％，?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ组?０％，?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ组?６３．３％，Ａｎｇｌｌ＋Ｄａｉｄｚｉｎ??组４０％；?（Ｃ）?ＨＥ染色观察小鼠血管病理变化，蓝色为胞核，红色为细胞质（放??大倍数：４倍，标尺：５００?ｐＭ）；?ＶＧ染色小鼠血管病理变化，黑色为弹力纤维，??红色为细胞质（放大倍数：４０倍，标尺：５０?ｐＭ）；?（Ｄ）弹力纤维降解评分评价??弹力纤维情况［＊Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

图３．抑制乙醒脱氢酶２活性可减少腹主动脉瘤形成中平滑肌细胞的??表型转化??（Ａ）免疫组化染色法检测血管组织ａ－ＳＭＡ的表达及分布，棕色代表ａ－ＳＭＡ，??蓝色代表细胞核；（Ｂ）免疫组化染色法检测血管组织ＳＭ２２ａ的表达及分布，棕??色代表ＳＭ２２ａ，蓝色代表细胞核（放大倍数：４０倍，标尺：５（＾ｉＭ）；?（Ｃ）ＲＴ－ＰＣＲ??评价血管组织?Ｍｙｏｃｄ?表达情况［＊Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳ０，＃Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．??ＡｎｇＩＩ＋ＤＭＳＯ］；?（Ｄ）?ＲＴ－ＰＣＲ评价血管组织ａ－ＳＭＡ表达情况［＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．??Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈彪;刘远文;;腹主动脉瘤的成因研究[J];柳州医学;2007年01期

2 乐天洋;;中老年人须谨防腹主动脉瘤[J];心血管病防治知识(科普版);2013年12期

3 张光耀;;改进腹主动脉瘤的筛查规则[J];心血管病防治知识(科普版);2011年02期

4 王深明;崔进;;我国腹主动脉瘤的治疗现状[J];中国普外基础与临床杂志;2017年01期

5 杨许君;;腹主动脉瘤破裂患者腔内治疗的护理探究[J];现代诊断与治疗;2016年21期

6 张利;李想;;小腹主动脉瘤研究进展[J];腹部外科;2016年03期

7 王聚全;;腹主动脉瘤破裂患者腔内治疗的护理探究[J];中国卫生标准管理;2015年32期

8 王豪夫;;1例腹主动脉瘤破裂合并主动脉腔静脉瘘腔内治疗[J];透析与人工器官;2016年02期

9 王雪钢;白斗;武少辉;张效杰;蒋岚杉;;血流动力学不稳定的破裂性腹主动脉瘤腔内治疗3例[J];疑难病杂志;2014年12期

10 ;3D打印技术辅助复杂腹主动脉瘤腔内治疗[J];华西医学;2014年12期

相关博士学位论文 前10条

1 钟林涛;METTL3调节M~6A甲基化修饰介导的前体miR34a加工诱导腹主动脉瘤发生发展[D];南方医科大学;2019年

2 翟茂材;熊果酸对腹主动脉瘤的抑制作用及机制研究[D];华中科技大学;2018年

3 韩宗霖;PGE2抑制剂通过miR-29b抑制腹主动脉瘤进展的机制研究[D];山东大学;2018年

4 李君;血脂水平影响腹主动脉瘤发展及破裂的潜在机制的探讨[D];山东大学;2018年

5 梅志军;结构-负荷失衡在腹主动脉瘤形成中的作用[D];第二军医大学;2004年

6 陆清声;腹主动脉瘤形成机制中血液动力学作用[D];第二军医大学;2005年

7 熊江;壁应力分布个体化预测腹主动脉瘤破裂的初步研究[D];第二军医大学;2005年

8 倪松;Ⅲ型胶原在腹主动脉瘤成因中的作用的初步研究[D];中国协和医科大学;2002年

9 郑曰宏;腹主动脉瘤致病相关基因的研究[D];中国协和医科大学;2002年

10 吴晓飞;雌激素在腹主动脉瘤形成中的作用[D];中国医科大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 薛飞;血管紧张素-（1-7）在腹主动脉瘤发病中的作用及机制研究[D];山东大学;2019年

2 王征;乙醛脱氢酶2对腹主动脉瘤发生发展的影响及机制研究[D];山东大学;2019年

3 胡家新;PM2.5促进腹主动脉瘤形成机制的研究[D];南京大学;2019年

4 陈红梅;近端狭窄所致血流动力学改变对兔腹主动脉瘤转归的影响[D];郑州大学;2019年

5 孙一力;LncRNA H19通过充当内源竞争性RNA促进白介素-6介导的血管炎症和腹主动脉瘤形成[D];南方医科大学;2018年

6 罗宽;常温体外循环在复杂腹主动脉瘤治疗中的应用[D];吉林大学;2018年

7 蒋珊珊;血糖、血脂对腹主动脉瘤腔内血栓的影响[D];中国医科大学;2018年

8 牛浩;高龄腹主动脉瘤患者的临床诊治特点及预后分析[D];中国医科大学;2018年

9 赵理杰;多酚酸类似物对腹主动脉瘤的治疗作用及初步药代动力学研究[D];安徽中医药大学;2018年

10 舒希;SERCA2 C674的失活与腹主动脉瘤的关系及调控机制[D];重庆大学;2018年

本文编号：2878823