UBC9调控心脏钠通道Na_v1.5表达和心脏钠电流密度关键作用与分子机制研究
【学位单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位年份】:2019
【中图分类】:R54
【部分图文】:
图 1-1 心脏钠通道 Nav1.5 的结构图Figure1-1 The structure of cardiac sodium channel Nav1.5Nav1.5 的半衰期起始于它的基因的转录,RNA 的剪接与在内质网中蛋白质的合成。从内质网,Nav1.5 通过分泌途径到达肌纤维膜发挥功能。Nav1.5 被转录修饰后,锚定在细胞骨架,储存在亚细胞组份,然后组装成多蛋白复合体,最后 Nav1.5 从它的膜的位置发生内吞然后被降解。虽然目前对这三个事件的时间尺度知之甚少,但是研究表明在狗的心脏中,Nav1.5 的半衰期是 32-36 h[37]。和大部分膜蛋白一样,有很多和 Nav1.5 相互作用的蛋白,调控 Nav1.5 的表达与功能[28, 31]。这些蛋白主要是锚定蛋白和通过转录后修饰和通道相互作用的蛋白。这些转录后修饰蛋白在调控心脏钠通道 Nav1.5 的生理学和病理学方面起着至关重要的作用,致使胞内兴奋信号的传导。而 Nav1.5 的 β 亚基目前研究只发现了 N 端的糖基化修饰[38]。心肌 Nav1.5 通道的转录后修饰不仅维持着基本的心脏功能,而且一些化
10图 1-2 人心脏钠通道 Nav1.5 和 Navβ1 亚基的转录后修饰位点。(A)使用算法/体外分析得到的修饰位点,(B)从心脏组织的蛋白质组分析得到的修饰位点[45]Figure 1-2 Localization of post-translational modification sites on the human cardiacNav1.5 and Navβ1 channel subunits. Findings obtained using in silico and/or in vitroanalyses (A) and native proteomic analyses from cardiac tissues (B) are compared directly[45].
图 2-1 真核表达载体 pCMV-HA 图谱Figure 2-1. Map of mammalian expresison vector pCMA-HA. DNA 片段与载体连接切回收后的 UBC9 DNA 片段和载体 pCMV-HA,测定浓度后,按的摩尔比为 3:1 的比例,用 T4 连接酶(Fermentas)进行连接反应,BC9 DNA 片段 5 μlMV-HA 载体 2 μl4 DNA ligase 1 μl4 DNA ligase Buffer 1 μlH2O 1 μl4 ℃酶连过夜。 制备大肠杆菌(E.coli)DH-5α感受态细胞
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本文编号:2883798
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