自噬与线粒体Cx43在心肌细胞缺氧复氧损伤中的变化及作用研究

发布时间：2020-12-12 00:58

　　目的:研究缺氧复氧对心肌细胞自噬和线粒体Cx43的影响,探讨自噬与线粒体Cx43在心肌细胞缺氧复氧损伤中的关系及作用。方法:分别对乳鼠原代心肌细胞和H9c2心肌细胞进行培养,根据培养情况最终选择H9c2心肌细胞进行后续实验。通过对H9c2心肌细胞更换为不含血清的低糖DMEM培养基并置于缺氧（5%C02、2%02）培养箱中12h作为缺氧处理,后恢复含血清的高糖DMEM培养基及常氧培养12h作为复氧处理。倒置显微镜观察细胞形态学变化、CCK-8检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测培养液中LDH活性,建立心肌细胞缺氧复氧（H/R）模型。按随机原则将心肌细胞分为五组:对照组、H/R组、格尔德霉素组（GA组）、3-甲基腺嘌呤组（3-MA组）、格尔德霉素+3-甲基腺嘌呤组（GA+3-MA组）。GA处理是在缺氧复氧前先对心肌细胞进行30min的GA（1μmol/L）预处理;3-MA处理是在缺氧复氧同时在培养基中加入3-MA（5mmol/L）进行干预。CCK-8检测细胞存活率,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot测定Beclin-1、LC3B、线粒体Cx43及线粒体磷酸化Cx4... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２?Ｈ９ｃ２心肌细胞??Ｆｉｇ．?１－２?Ｈ９ｃ２?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??

Ｂ?Ｃ??图１－１原代心肌细胞Ａ：单个、分散的心肌细胞，Ｂ：心肌细胞簇，Ｃ：心肌细胞网??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ?Ａ：?ｓｉｎｇｌｅ，?ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，?Ｂ：?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ??ｃｌｕｓｔｅｒ，?Ｃ：?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ?ｎｅｔｗｏｒｋ??１．４．２?Ｈ９ｃ２心肌细胞培养情况??于倒置显微镜下观察细胞，Ｈ９ｃ２心肌细胞呈梭形，细胞结构清晰，生长情??况良好。??图１－２?Ｈ９ｃ２心肌细胞??Ｆｉｇ．?１－２?Ｈ９ｃ２?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??１．?４．?３心肌细胞缺氧复氧模型建立情况??１３??

?Ｓ?２－??ｕｌｎ?１ＪＪ，?１１?Ｊ＿ｎ?＾?Ｊｎ?１，１１，１?ｎ?ｎ??图２－２?各组细胞Ｂｅｃｌｉｎ－１和ＬＣ３Ｂ的蛋白表达水平Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测结果，Ｂ：??各组Ｂｅｃｌｉｎ－１蛋白水平的比较，Ｃ：各组ＬＣ３ＢＩＩ／ＬＣ３ＢＩ比值的比较（ｆ±ｓ，?ＳＰ＜０．?０５ｖｓ??对照组，＇？＜〇．?０５?ｖｓ?Ｈ／Ｒ?组）??Ｆｉｇ．２－２?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ａｎｄ?ＬＣ３Ｂ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?Ａ：?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ，?Ｂ：??ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ，?Ｃ：?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ＬＣ３ＢＩＩ／ＬＣ３ＢＩ?ｒａｔｉｏｓ?ｉｎ??ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ（ｘ±ｓ，?＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?＊Ｐ＜０．０５ｖｓ?Ｈ／Ｒ?ｇｒｏｕｐ）??２．?４．?２各组线粒体Ｃｘ４３及ｐ－Ｃｘ４３蛋白水平的比较??由图２－３可见，Ｈ／Ｒ组的线粒体Ｃｘ４３?


本文编号：2911551