1型1-磷酸鞘氨醇受体（S1PR1）介导的S1P信号通路通过抑制心肌细胞自噬保护心脏功能研究

发布时间：2020-12-19 07:11

　　研究目的:探讨1-磷酸鞘氨醇（S1P）及其受体在抑制心肌细胞自噬、抑制心肌细胞肥大、保护心脏功能中所起的作用。研究方法:使用S1P刺激饥饿及PE处理的心肌细胞,通过测定心肌细胞内自噬小体数量、自噬相关蛋白、重要的自噬功能基因表达情况研究其在心肌细胞自噬中的作用,通过测定心肌细胞面积、肥大相关基因表达情况研究其在心肌细胞肥大中的作用。随后,使用不同siRNA分别敲低小鼠心肌细胞三种S1P受体的表达,以确定心肌细胞中介导S1P信号通路的受体类型。最后,通过Cas9技术在小鼠心脏中敲除1-磷酸鞘氨醇受体1（S1PR1）,通过测定小鼠心肌细胞自噬、心肌细胞肥大程度及心脏功能,验证S1PR1受体在心脏自噬及心肌肥厚中发挥的作用。研究结果:S1P干预后饥饿诱导的心肌细胞自噬及PE诱导的心肌细胞肥大明显减弱,表现为心肌细胞内自噬小体形成减少、自噬相关蛋白LC3II/I、P62及重要的自噬功能基因Atg5、Atg12、Beclinl和LC3B表达减少,心肌细胞相对面积减小,并且心房钠尿肽（atrial natriuretic factor,ANF）、脑利钠肽（brain natriuretic pep... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１：?ＳＩＰ抑制饥饿诱导的心肌细胞自噬??Ａ．?ＳＩＰ干预策略示意图

（终浓度为ｌ〇〇ｎｍｏｌ／Ｌ）分别对普通培养及ＰＥ?（终浓度为ｌＯＯ＾ｍｏｉ／Ｌ）处理的心??肌细胞进行刺激，４８小时后使用ａ－辅肌动蛋白（ａ－ａｃｔｉｎｉｎ）进行免疫荧光染色，??之后在免疫荧光显微镜下观察拍照并统计心肌细胞大小（图２－Ａ）。结果显示ＰＥ??处理能有效刺激心肌细胞的肥大生长，而Ｓ１Ｐ干预能明显抑制ＰＥ诱导的心肌细??胞肥大（图２－Ｂ）。心肌细胞肥大増生时往往会激活胚胎期基因的表达，在本研??究中，我们检测了心房钠尿肽（ＡＮＦ）、脑利钠肽（ＢＮＰ）、肌球蛋白重链（ｐ－ＭＨＣ）及??骨骼肌和心肌肌动蛋白（ＳＫＡ）等胚胎期基因的表达水平，发现Ｓ１Ｐ干预后，ＰＥ??处理的心肌细胞中这些基因表达都较对照组显著降低（图２－Ｃ）。以上结果均表??明，Ｓ１Ｐ可抑制ＰＥ诱导的心肌细胞肥大。??３０??

此前已有报道，心肌细胞上三种Ｓ１Ｐ受体的亚型的表达数量为：??Ｓ１ＰＲ１？Ｓ１ＰＲ３＞Ｓ１ＰＲ２，我们通过?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?方法检测心室??肌细胞Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２及Ｓ１ＰＲ３三型受体的表达证实了此结论（图３－Ａ）。随后，??我们设计了针对心肌细胞Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３三型受体的ｓｉＲＮＡ，转染乳鼠??心肌细胞后，我们在心肌细胞中成功敲低了?Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２及Ｓ１ＰＲ３三型受体??的表达（图３－Ｂ）。??３２??

【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2017》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿.  中国循环杂志. 2018(01)
[2]心肌细胞过表达miR-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤[J]. 侯宁,王剑,李振华,曹阳,范开吉,杨晓.  遗传. 2012(03)
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博士论文
[1]miR-199在心肌肥厚中的功能研究[D]. 李振华.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[2]H19在心肌肥厚中的功能研究[D]. 刘澜涛.中国人民解放军军事医学科学院 2016

硕士论文
[1]组蛋白乙酰化酶p300协同MRTFs激活心肌肥厚标志基因表达[D]. 李明哲.武汉科技大学 2012



本文编号：2925497