CD38缺失通过NAD + /Sirt信号通路减轻D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老

发布时间：2021-01-08 04:29

　　研究背景和目的:衰老是多种因素共同作用引起的器官、组织的老化及功能衰退。随着生活水平的提高及人口老龄化的加剧,衰老及衰老相关疾病的发病率显著升高。引起衰老的病理因素较多,其中过度的氧化应激反应是引起衰老发生的主要原因之一。NAD⁺作为氧化还原反应的关键辅酶在调控细胞代谢中起重要作用。研究表明伴随年龄的增长,细胞内NAD⁺含量显著性下降。在哺乳类细胞内,CD38是NAD⁺主要水解酶,在调节细胞内NAD⁺水平上扮演重要角色。我们前期工作表明,CD38基因敲除鼠明显耐受AngII诱导的心肌肥大,保护心脏缺血/再灌注损伤以及明显减轻高脂饮食诱导的心脏氧化应激损伤。然而,CD38在心脏衰老中的作用尚未见报道。因此,本课题将应用CD38敲减的心肌细胞系,探讨CD38介导的NAD⁺代谢途径在心肌细胞衰老模型中的作用及其分子机制,以期为延缓心脏衰老提供新的预防和治疗的作用靶点。实验方法:1.心肌细胞衰老模型的制备及其分析:H9c2细胞和CD38敲减的H9c2细胞分别给予10 g/L的D-半乳糖... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

-半乳糖诱导H9c2细胞衰老并增加CD10g/LD-gal处理细胞48h后衰老细胞数量；（

25图 2 NAD+代谢通路关键酶在自然衰老小鼠中显著下调。（A）和（B）WB 检测大小约 1 月龄和 12 月龄小鼠心脏组织中 p16 的蛋白表达水平及定量分析；（C）Q-PCR 检测大小约 1 月龄和 12 月龄小鼠心脏组织中 p16 的 mRNA 水平；（D）、（E）和（F）分别表示 WB 检测大小约 1 月龄和 12 月龄小鼠心脏组织中 Sirt1、NAMPT 的蛋白表达水平及定量分析; （G）Q-PCR 检测大小约 1 月龄和 12 月龄小鼠心脏组织中 NAMPT 的 mRNA 水平。P*＜0.05，P**＜0.01，P ***＜0.001，n=3。

图 3 CD38 干扰减轻 D-gal 诱导的心肌细胞衰老。（A）和（B）分别表示 WB 检测 H9c2 心肌细胞系中 CD38 基因的干扰效率及蛋白定量分析；（C）利用 β-半乳糖苷酶染色法检测 10g/LD-gal 处理 CD38 干扰心肌细胞系 48h 后衰老细胞数量；（D）、（E）和（F）分别表示 WB检测D-gal诱导CD38干扰心肌细胞系中p16及p21的蛋白表达及蛋白定量分析。P*＜0.05，P **＜0.01，P ***＜0.001，n=3。3.4 CD38 干扰降低 D-gal 诱导的心肌细胞的氧化应激水平衰老的发生时常伴有细胞内氧自由基的增加。同时我们也发现 D-gal 刺激细胞后可以引起细胞内的氧化应激水平的增加。因此，我们进一步探讨 CD38 在 D-gal 诱导的细胞氧化应激中的作用。文献及我们已发表的数据都表明 CD38 敲除显著增加细胞内 NAD+的含量。Sirt 家族蛋白是以 NAD+为底物的去乙酰化酶，NAD+含量增加会显著增加 Sirt 的酶活性。我们首先用 Western blot 检测了总蛋白的乙酰化水平以间接反映 Sirt 的酶活性。结果发现与对照组相比，D-gal 刺激显著增加蛋白的乙酰化水平，说明 D-gal 降低了 Sirt 的去乙酰化酶活性。而 CD38干扰在有无 D-gal 刺激下都显著降低总蛋白的乙酰化水平，表明 CD38 敲减能增


本文编号：2963911