Ang-（1-7）通过抑制NCX1/Ca 2+ /CaMKII通路拮抗AngⅡ诱导的成纤维细胞表型转化的实验研究

发布时间：2021-01-21 00:27

　　背景:成纤维细胞是心脏内的重要细胞组成成分,成纤维细胞的功能变化与心肌细胞联系紧密,直接影响到心肌的的发育、肥大、机械和电学的活动。心脏成纤维细胞的表型转化（fibroblast myofibroblast transition,FMT）与心肌炎症、心肌肥大以及心肌梗死预后密切相关。在外界刺激下,成纤维细胞增殖、分化,分泌大量的细胞外基质（extra-cellular matrix proteins,ECM）,从而引起心脏纤维化,发生纤维化重构,诱发心律失常以及降低心脏功能。近年来发现钠/钙交换蛋白（Sodium/calcium exchange protein,NCX）、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（Calcium/calmodulin dependent protein kinase II,CaMKII）是重要的介导FMT的信号分子,其中CaMKII直接介导了血管紧张素II（Angiotensin II,AngⅡ）诱导的FMT。本课题组前期已经证实心外膜高表达血管紧张素转化酶2（Angiotensin converting enzyme 2,ACE2）可以增加心房肌中血管紧张素-... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

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前言
第一部分 ：Ang-（1-7）抑制NCX1及CaMKII活性降低AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖和表型转化
    1 主要材料和仪器设备
        1.1 主要试剂和材料
        1.2 主要试剂的配制
        1.3 主要实验仪器
    2 实验方法
        2.1 新生SD乳鼠原代心脏成纤维细胞培养与鉴定
        2.2 细胞实验分组
        2.3 AngⅡ诱导成纤维细胞表型转化模型
        2.4 成纤维细胞NCX1、NCX3亚型的表达
        2.5免疫荧光检测α-SMA、KI67
        2.6 DHE检测细胞内ROS
        2.7 Western blot
        2.8 细胞内钙离子检测
        2.9 一氧化氮检测
        2.10 定量PCR
        2.11 统计学分析
    3 结果
        3.1 成纤维细胞鉴定结果
        3.2 AngⅡ有效的药物浓度和处理时间
        3.3 NCX1及NCX3在成纤维细胞及心脏中的表达
        3.4 NCX1、CaMKII激活与成纤维细胞表型转化
        3.5 .细胞内活性氧水平
        3.6 Western blot结果
        3.7 细胞内钙离子变化
        3.8 定量PCR检测胶原交联相关基因的表达
    4 讨论
    小结
    参考文献
第二部分 ：Ang-（1-7）/eNOS通路激活抑制AngⅡ/CaMKII诱导的大鼠心脏纤维化重构
    1 主要材料和仪器设备
        1.1 主要试剂和材料
        1.2 主要试剂的配制
        1.3 主要实验仪器
    2 实验方法
        2.1 AngⅡ诱导的Sprague Dawley大鼠纤维化模型建立
        2.2 模型组大鼠血压的检测
        2.3 Western blot
        2.4 病理组织学检查
    3 结果
        3.1 AngⅡ诱导的大鼠心脏纤维化重构
        3.2 动物心脏DHE染色结果
        3.3 动物心脏组化染色结果
        3.4 动物心脏免疫荧光染色结果
        3.5 动物心脏Western blot结果
    4 讨论
    小结
    参考文献
第三部分 ：Cx43依赖性的CaMKII和TGF-β1信号通路介导AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞表型转化
    1 主要材料和仪器设备
        1.1 主要试剂和材料
        1.2 主要实验仪器
    2 实验方法
        2.1 实验分组
        2.2 Western blot检测
        2.3 细胞荧光免疫双标检测Cx43与α-SMA
        2.4siRNA转染干扰TGF-β1
        2.5 免疫组化检测心肌组织Cx43的表达
        2.6 免疫荧光双标检测心肌组织中Cx43与α-SMA的表达
    3 结果
        3.1 Ang-（1-7）及AIP抑制心机肥大及纤维化
        3.2 抑制CaMKII活性恢复心室肌Cx43表达
        3.3 抑制CaMKII激活增加成纤维细胞Cx43表达
        3.4 Westren blot检测心肌中CaMKII的表达
        3.5 AngⅡ促进体外培养的成纤维细胞Cx43表达
        3.6 TGF-β1si-RNA抑制成纤维细胞Cx43的表达
        3.7 抑制CaMKII活性降低成纤维细胞中Cx43、α-SMA的表达
    4 讨论
    小结
    参考文献
全文总结
文献综述
    参考文献
致谢
攻读博士学位期间完成的论文



本文编号：2990080