内质网应激参与房颤发生的机制研究

发布时间：2021-01-28 05:35

　　目的:探讨内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress/ERS）参与房颤发生的机制。方法:1.大鼠心房颤动模型的建立:10只8周龄雄性SD大鼠经食道快速心房起搏后,观察房颤诱发的情况,并记录房颤诱发前后心电图的改变,制备房颤组模型（A F）,对照组（control group）除不行经食道快速心房起搏,其余同AF组。2.大鼠及乳鼠内质网应激模型建立:用衣霉素刺激大鼠（成年）心肌细胞,建立内质网应激模型（衣霉素组1）,用衣霉素刺激乳鼠心肌细胞,建立细胞内质网应激模型（衣霉素组2）,在此基础上转染miR-105 mimic建立衣霉素+miR-105mi mic组,磷酸盐缓冲液（PBS）处理成鼠心肌细胞建立对照组1,磷酸盐缓冲液（P BS）处理乳鼠心肌细胞建立对照组2,对照组2加入miR-105mimic建立对照组+mi R-105mimic组。3.GRP78、RyR2及miR-105检测:蛋白免疫印迹法检测葡萄糖调节蛋白GR P78、RyR2磷酸化表达水平,Real-time PCR检测心房颤动后内质网应激中的mi R-105。结果:1.10只SD大鼠经食道快速心房... 

【文章来源】：西安医学院陕西省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BL-420F生物机能系统描记大鼠心电图(记录标准Ⅱ导联)

西安医学院临床医学硕士专业学位论文27抗甘油酸-3-磷酸脱氢酶抗体中国杭州GoodHere公司TUNEL检测试剂盒上海嵘威达实业有限公司SYBR-Green荧光试剂盒中国西安海宁生物工程有限公司2.2主要仪器设备表2主要仪器设备仪器名称公司小动物心电图机湖南鼠行生物科技有限公司流式细胞检测仪美国CST公司反转录仪美国ABI公司实时荧光定量检测系统美国福斯特应用生物医学公司电泳仪美国Bio-Rad公司转膜仪美国Bio-Rad公司化学发光成像仪瑞士罗氏公司2.3.统计学处理实验数据均采用SPSS16.0进行统计学分析，数据比较采用Student-t检验。P<0.05为具有统计学意义。3实验结果3.1大鼠心房颤动模型的制备与鉴定10只SD大鼠经食道快速心房起搏后，行心电图检查观察房颤诱发的情况。房颤模型制备成功数6只，（n=6，成功率=60%）3.1.1心电图（Electrocardiogram/ECG）评价心房颤动模型手术前及手术后8天分别行心电图检查，明确心房颤动模型的制备。心电图示：①正常心房P波消失；②f波出现，中间无等电位线；伞心室率较起搏前明显加快。具体如图2。大鼠窦性心律大鼠房颤心律图2大鼠窦性及房颤的心电图

西安医学院临床医学硕士专业学位论文283.1.2GRP78评估大鼠内质网应激的程度GRP78是发现最早的一类内质网伴侣蛋白，是进化保守的应激蛋白，既往研究表明，内质网活化伴随GRP78显著升高，因此GRP78增高，可作为内质网应激活化的重要指标。如图3示：n=6,对照组VS房颤组(0.385±0.179VS1.373±0.431)与对照组比较，AF组心房肺静脉交界处心肌组织GRP78蛋白水平表达显著增加（P<0.05），GAPDH无显著变化（P＞0.05），表明房颤大鼠内质网应激活化；AF组与对照组GRP78，CHOP蛋白水平表达水平比较，*与对照组相比，P<0.05；图3房颤大鼠模型内质网应激活化3.2大鼠房颤内质网应激模型中RyR2的表达大鼠房颤内质网应激活化后，在心房肺静脉交界处心肌组织中，应用Westernblot检测法检测，n=3,房颤组RyR2总含量对照组VS房颤组(1.23±0.28VS2.23±0.27)，与对照组相比，房颤组RyR2mRNA表达水平显著增加（图4A，P<0.05）；与对照组相比，房颤组RyR2蛋白，PS2814-RyR2及PS2808-RyR2蛋白水平表达均显著增加（P<0.05）（图4A）；Real-timePCR检测法检测，n=5,eRyR2/β-actinmRNA表达量对照组VS房颤组(1.0±0VS14.83±3.38)与对照组相比，房颤组eRyR2/β-actinmRNA表达量显著增高（P<0.01）（图4B）；表明大鼠房颤内质网应激活化后，RyR2总含量增高，RyR2磷酸化水平显著增高。图4A图4B

【参考文献】：
期刊论文
[1]心房颤动:目前的认识和治疗的建议-2018[J]. 黄从新,张澍,黄德嘉,华伟.  中国心脏起搏与心电生理杂志. 2018(04)
[2]心房颤动动物模型建立的方法学[J]. 陈雯雯,罗章源,陈颖敏.  中国心脏起搏与心电生理杂志. 2010(05)



本文编号：3004446