Pannexin-1半通道开放诱导FAM134B依赖性内质网自噬介导Apelin-13促H9C2和HL-1细胞肥大

发布时间：2021-02-20 05:27

　　目的:APJ受体蛋白作为一种七次跨膜的G蛋白偶联受体,与其内源性活性肽配体Apelin所形成的Apelin/APJ系统在心血管疾病的发生发展中起着重要的作用。实验室前期报道Apelin-13/APJ系统通过诱导内质网自噬途径促进心肌细胞肥大,此外Western Blot的结果发现,Apelin-13促进大鼠心肌细胞H9C2中Pannexin-1、FAM134B、自噬蛋白LC3以及细胞肥大因子ANP、BNP的表达。本文拟采用大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1研究Apelin-13对Pannexin-1的蛋白水平、Pannexin-1半通道的开放、FAM134B的水平、内质网自噬和心肌细胞肥大的作用,在前期基础上进一步验证Apelin-13能否通过影响Pannexin-1蛋白的表达,并激活Pannexin-1半通道从而诱导FAM134B依赖性内质网自噬,作用于大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1致使细胞肥大,从而揭示Apelin-13/APJ系统在心血管疾病中的作用机制,为将APJ受体作为心肌肥厚治疗的靶标提供新的理论基础。方法:1.RNA干扰:设计干扰链SiRNA-FA... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：105 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Apelin-13促进了Pannexin-1在H9C2和HL-1细胞中的表达

18图2.Apelin-13激活了H9C2和HL-1细胞中的Pannexin-1半通道。（A）染料转移试验的结果表明，Apelin-13（1μM，24h）促进大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞对LY的摄取，而F13A（1μM，24h）抑制Apelin-13所诱导的LY的摄龋（B）染料转移测定的结果表明，CBX（10μM，24h）抑制Apelin-13（1μM，24h）所诱导的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞对LY的摄龋（C）染料转移试验的结果表明，PBC（200μM，24h）抑制Apelin-13（1μM，24h）所诱导的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞对LY的摄龋（D）ATP检测试剂盒的分析结果表明，Apelin-13（1μM，24h）降低大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞内ATP水平，而F13A（1μM，24h）处理可逆转Apelin-13降低的胞内ATP水平。（E）ATP检测试剂盒的分析结果表明，CBX（10μM，24h）逆转Apelin-13（1μM，24h）降低的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞内ATP水平。（F）ATP检测试剂盒的分析结果表明，PBC（200μM，24h）逆转Apelin-13（1μM，24h）降低的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞内ATP水平。所有数据均为平均值±SD（n=3，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.005，****p<0.001与对照组相比；＃p<0.05，##p<0.01，###p<0.005，####p<0.001与Apelin-13组相比）。Figure.2Apelin-13activatedthePannexin-1hemichannelinH9C2andHL-1cells.(A)ResultsfromdyetransferassaydemonstratedthatexposureofH9C2andHL-1cellstoApelin-13(1μM,24h)promotedtheuptakeofLY,butF13A(1μM,24h)treatmentreducedtheApelin-13-inducedLYuptake.(B)ResultsfromdyetransferassaydemonstratedthatCBX(10μM，24h)treatmentattenuatedtheApelin-13-inducedLYuptakeinH9C2andHL-1cells.(C)Resultsfromdyetransfera

21图3.Apelin-13通过激活H9C2和HL-1细胞中的Pannexin-1半通道来促进自噬。（A）免疫荧光的结果表明，Apelin-13（1μM，24h）促进大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞中KDEL（红色）与LC3B（绿色）的共定位，但F13A抑制Apelin-13诱导的KDEL与LC3B共定位。（B）免疫荧光的结果表明，CBX（10μM，24h）抑制Apelin-13诱导的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞中KDEL与LC3B的共定位。（C）免疫荧光的结果表明，PBC（200μM，24h）抑制Apelin-13诱导的大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞中KDEL与LC3B的共定位。（D）免疫荧光的结果表明，Apelin-13（1μM，24h）促进大鼠H9C2心肌细胞和小鼠HL-1心房肌细胞中KDEL（红色）与CD63（绿色）的共定位，但F13A抑制Apelin-13诱导的KDEL与CD63共定位。（E）免疫荧光的结果表明，CBX（10μM，24h）抑制H9C2和HL-1中Apelin-13所诱导的KDEL与CD63的共定位。（F）免疫荧光的结果表明，PBC（200μM，24h）抑制H9C2和HL-1中Apelin-13所诱导的KDEL与CD63的共定位。（20×10）Figure.3Apelin-13promotedreticulophagybyactivatingthePannexin-1hemichannelinH9C2andHL-1cells.(A)ResultsfromImmunofluorescencedemonstratedthatexposureofH9C2andHL-1cellstoApelin-13(1μM,24h)promotedtheexpressionofthecolocalizationofKDEL(red)withLC3B(green),butF13A(1μM,24h)treatmentattenuatedtheApelin-13-inducedthecolocalizationofKDELwithLC3B.(B)ResultsfromImmunofluorescencedemonstratedthatCBX(10μM,24h)


本文编号：3042296