慢病毒载体介导microRNA-1基因修饰骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死的实验研究

发布时间：2021-02-28 08:20

　　目的：通过携带miRNA-1的慢病毒载体（Lentivirus vector,LV）转染大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells），观察miR-1过表达慢病毒载体转染的BMSCs移植治疗大鼠心肌梗死（Myocardia infarction,MI）的作用及其相关机制，以期为心肌梗死寻找新的治疗策略。方法：以全骨髓培养法获取BMSCs，并予以扩增、鉴定；构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的miR-1慢病毒载体并转染BMSCs，建立miRNA-1基因修饰BMSCs（GFP作为细胞标记）；通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌梗死（AMI）模型。将30只大鼠通过随机平分法分为空白对照组、假手术组（Sham组）、心肌梗死组（Vehic组）、未转染病毒组（BMSCs组）、miR-1重组慢病毒组（miR-1/BMSCs组），每组6只，在AMI建模1天后，经尾静脉注射途径分别以100μl生理盐水或2×106/100μl相应BMSCs分别干预各实验组并继续饲养28天。分别于建模前及建模后28天超声心动图观察心脏功能及结构改变；饲养28天后处死大鼠，留取血液... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BMSCs形态学变化

BMSCs 流式细胞鉴定体的构建的质粒，PCR 产物经电泳示在 289bp 处有条明大小相符，表明已成功获取 miR-1 基因（见段（见图 3）。 3 酶切获取目的基因质粒（2: pGC-FU Vector;3: pGC-FU Vector EcoR I 酶切marker 1 2

并与目的基因片段大小相符，表明已成功获取 miR-1 基因（见图3A）。同样方法获取载体基因片段（见图 3）。图 3 酶切获取目的基因A 酶切目的基因质粒，B 酶切载体质粒（2: pGC-FU Vector;3: pGC-FU Vector EcoR I 酶切产物）3.2.2 重组慢病毒载体构建及鉴定将目的基因片段交换入线性化表达载体，并转化大肠杆菌，构建的GV320-miR-1 阳性克隆 PCR 产物电泳示在 5 至 12 泳道均出现 3822bp 的条带（见图 4），阳性克隆质粒 DNA 测序结果显示，重组质粒中插入的基因序列与目的基因序列一致，表明 miR-1 过表达慢病毒载体构建成功。CD45CD34CD44 CD29marker目的基因marker 1 2

【参考文献】：
期刊论文
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[2]大鼠骨髓MSCs表面分子检测及诱导分化研究[J]. 王刚,吕同德,马静,常雅萍.  中国实验诊断学. 2008(01)
[3]移植时机对骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的影响[J]. 曹丰,贾国良,牛丽丽,张鹏,焦文仓,王冬梅,李艳华,裴雪涛.  第四军医大学学报. 2005(01)
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本文编号：3055578