冠心病相关SLC22A3基因中新发现负性调控序列的性质与功能鉴定

发布时间：2021-03-08 21:31

　　目的:拟对课题组前期发现的冠心病相关SLC22A3基因intron7区域中的2段DNA负性调控序列的性质及功能进行研究,以明确其为沉默子还是绝缘子。方法:利用生物信息学分析两段负性调控序列在所培养细胞系中的脱氧核糖核酸酶I（DNaseI）敏感性,并以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC）为模板,PCR扩增两负性调控序列,以pGL3-Control质粒作为工具载体,将两段序列克隆入报告基因Luciferase（LUC）的启动子与增强子之间以及增强子的下游,构建4组重组质粒,并以pGL3-Control质粒作为空白对照,与内参质粒pRL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T,24h后检测荧光素酶活性。结果:两段负性调控序列均位于DNaseⅠ超敏位点,明确了其为顺式调控元件的性质。4组重组质粒pGL3-con-SLCi7-447X、pGL3-con-SLCi7-447S、pGL3-con-SLCi7-460X以及pG L3-conSLCi7-460S荧光素酶活性分别为（2.353±0.323）、（3.046... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组质粒构建示意图

学分析使用统计软件 SPSS 25.0 来分析数据，荧光素酶活性用 3准差（x±s）表示，采用单因素方差分析（ANOVA），组当 P﹤0.05 时，认为差异具有统计学意义。性调控序列的 DNaseI 敏感性分析相关 SLC22A3 基因 intron7 区域的两段负性调控序列如图 2、3 所示，均位于 DNaseⅠ超敏位点。明确了其顺式调控元件中，具备负性调控作用的有绝缘子及沉默子，因的功能鉴定试验。DNa

注：X 轴表示 NO10.22 上下游各延伸 100bp 的基因片段（填充区域为 NO10.22 片段），Y 轴表示 DNase I-seq 信号强度图 3 NO10.22 的 DNA 酶Ⅰ敏感性分析Fig.3 DNaseⅠhypersensitivity of NO10.22质粒的构建增两目的序列所得产物 SLCi7-447-X、SLCi7-447-S、SLC-S 通过 1％琼脂糖凝胶电泳后得到 447bp、447bp、460bp、纯化回收后，分别克隆入 pGL3-Control 质粒以构建重组质入启 动子 与增 强子之 间获 得重组质粒 pGL3-con-SLSLCi7-460X，插入增强子下游获得重组质粒 pGL3-con-SLSLCi7-460S；重组质粒 pGL3-con-SLCi7-447X、pGL3-con-

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：3071704