C3H10T1/2向心肌样细胞特异分化过程中Akt与Islet-1/GCN5蛋白质复合体关系的研究

发布时间：2021-03-15 18:48

　　目的:用过表达Islet-1基因的慢病毒感染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2并诱导其向心肌样细胞的特异分化。通过检测激活或抑制Akt活性的情况下,Islet-1与GCN5蛋白质结合量的变化情况,研究在此过程中Akt与Islet-1/GCN5蛋白质复合体的关系,以此深入探讨间充质干细胞特异性诱导分化为心肌样细胞的调控机制。方法:1.将生长状况良好的间充质干细胞C3H10T1/2以5×10⁴个/瓶的密度铺在专用细胞培养瓶中,待细胞汇合度为20³0%时用携带GFP或Islet-1基因的慢病毒感染细胞。96h后流式细胞术检测细胞感染效率;Western blot、细胞免疫荧光检测感染后细胞Islet-1、cTnT和Cx43蛋白质水平及定位;倒置显微镜、荧光显微镜观察感染后细胞形态学方面的变化;qRT-PCR技术检测心肌特异性基因GATA4、Nkx2.5、Mef2c mRNA时序性改变情况。2.分别利用Akt激活剂IGF-1、Akt特异性抑制剂MK-2206作用Islet-1慢病毒感染后的细胞,CCK-8法检测加入IGF-1后对病毒感染后细胞活力的影... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

荧光显微镜观察荧光蛋白GFP的表达情况(*100)

流式细胞仪检测各组Islet-1慢病毒的感染效率

WesternBlot检测各组细胞Islet-1蛋白质水平Fig.3TheproteinlevelsofIslet-1byWesternBlot

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3084641