锌指蛋白A20的O-GIcNAc修饰在急性血管损伤的保护作用及分子机制

发布时间：2021-03-15 22:28

　　[目的]近来研究发现短期快速增加细胞内的O-GlcNAc （氧连-N-乙酰葡萄糖胺）修饰水平可发挥血管保护作用,对抗急性血管损伤效应,但具体分子机制并不清楚。本研究旨在探讨锌指蛋白A20蛋白的O-GlcNAc修饰对于血管炎症的影响及分子机制。[方法]1)给予Thiamet-G（一种特异性的OGA抑制剂）预处理大鼠主动脉平滑肌细胞（rat aortic smooth muscle cells, RASMCs）,再给予肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）处理,采用RT-PCR口Western blot的方法,分析检测A20的表达,观察增加细胞内O-GlcNAc修饰水平对TNF-α诱导的A20表达的影响。2)给予腺病毒载体携带的OGA（O-GIcNAc hydrolase,O-N-乙酰葡糖胺水解酶）/OGT（O-GIcNAc transferase,O-N-乙酰葡糖胺转移酶）感染预处理RASMCs,再给予TNF-α处理,采用和Western blot的方法,分析检测A20蛋白的表达,观察增加细胞内O-GlcNAc修饰水平对TNF-α诱导的A20表达... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Thiamet-G预处理对丁?TNF-a诱导的A20mRNA表达的影响

OGA降低细胞内的0-GlcNAc修饰水平的同时，细胞内TNF-a诱导的A20蛋白表达增高，见图6。A- B.control OGT甲.… 1 1 * GvfthideTNF-a ^ ^ ? I U— 丨 >f< J■ iNF-a> 2.5 ‘....... tC TA20 ‘ ‘ 參一. ￡ 15:l.......Tubulin lew °control OGTC- D.OGA control — * O vehicleTNF-a — + — + ^ 7.0 I 6,15 I j；巧 圓！!！A20 MKHW 參 ? ? ； o 、。 ■ > 4.0 3,36■丨：丨丨「■ ：_ “ ： ： ■ I - ‘ - ■"T"u b UI i n OGA control图6分别)4J OGT/OGA感染RASMCs western bolt方法检测A20蛋内的表达情况注：图A给予携带OGT的脱病毐载体感染RASMCs24h,再给予TNF-a (lOmg/ml)处理6h,细胞内蛋白的O-GlcNAc水平升高的同时A20的蛋白表达降低，图B表示imageJ软件处理灰度值的柱

扬州人学硕I:论义给予携带OGA的腺病毒载体感染RASMCs24h，再给予TNF-a ( lO0-GlcNAc水平降低的同时A20的蛋内表达增加；图D是image.丨P<0.05。增加细胞内的O-GkNAc修饰水平后，A20蛋白的泛素化 先给予 Thiamet-G 150nM 预处理 Ih，再给予 TNF-a(10m体进行免疫共沉淀，研究Thiamet-G预处理增加细胞内的本身的泛素化水平。研究发现：增加细胞内的0-GlcNAc，这点能够说明在细胞内的O-GlcNAc修饰水平上调后,A20A20蛋白的表达却轻度降低，可能就是通过上调0-GlcNAc化降解。见图7。RASMC

【参考文献】：
期刊论文
[1]O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺诱导LPS干预的大鼠心肌细胞HSP70表达中的作用[J]. 龚俊松,景亮.  中华麻醉学杂志. 2010 (04)
[2]蛋白质O-GlcNAc糖基化及其细胞生物学功能[J]. 杨新颖,李静,耿美玉.  细胞生物学杂志. 2007(05)
[3]核转录因子NF-κB对大鼠血管球囊损伤后新生内膜形成的作用[J]. 周俊,陆国平,吴春芳,陈桢玥.  上海交通大学学报(医学版). 2006(08)



本文编号：3084919