蓝莓花青素中锦葵色素对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎症反应损伤的保护作用研究

发布时间：2021-03-20 21:39

　　研究背景心血管疾病是危害人类健康的头号杀手,而80-90%心血管疾病患者都伴随着高血压。“阻止高血压饮食计划（DASH）"中重要的一条就是增加水果蔬菜的摄入量。细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为重要的炎症因子,可以诱导内皮细胞表达相应蛋白,能显著增强血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和血管细胞间粘附分子-1（VCAM-1）蛋白和mRNA的表达,促进炎症发生及发展进程。蓝莓作为功能性食品,其果实中花青素的含量很高,具有抗炎症、增强心脏功能、改善血管循环、防止脑神经衰老、明目及抗癌等独特功效。研究发现蓝莓花青素中锦葵色素的含量很高,因此本文以氯化锦葵色素、氯化锦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化锦葵色素-3-半乳糖苷为研究对象,研究它们对TNF-α诱导的体外人脐静脉内皮细胞炎症的保护作用及糖苷协同作用,并从分子基础上研究其作用机制,为心血管疾病的研究提供一定的理论基础。研究目的：1.体外分离人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用TNF-α干预细胞,建立内皮细胞功能损伤所致的炎症模型,观察不同浓度氯化锦葵色素、氯化锦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化锦葵... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
引言
    参考文献
第一章 文献综述
    1.1 蓝莓的概况
        1.1.1 蓝莓的种类及分布
        1.1.2 蓝莓的营养价值及活性功能
        1.1.3 蓝莓的开发价值
    1.2 蓝莓花青素
        1.2.1 蓝莓花青素简介
        1.2.2 蓝莓花青素之锦葵色素
        1.2.3 抗氧化物质花青素与炎症反应性疾病的关系研究
    1.3 肿瘤坏死因子-a的简介
        1.3.1 肿瘤坏死因子的分类及分子结构
        1.3.2 受体的生物学性质
        1.3.3 肿瘤坏死因子的生物学特性
        1.3.4 核转录因子-kB信号通路
        1.3.5 炎症反应损伤相关的炎症因子
        1.3.6 肿瘤坏死因子作用及与炎症反应的关系研究
    1.4 本课题的研究意义与内容
        1.4.1 本课题的研究意义
        1.4.2 本课题的研究内容
    参考文献
第二章 肿瘤坏死因子TNF-α对人脐静脉内皮细胞粘附因子和趋化因子的调节.
    2.1 材料
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验试剂
        2.1.3 试验仪器
        2.1.4 试剂配置
    2.2 试验方法
        2.2.1 人脐静脉内皮细胞分离、培养和鉴定方案
        2.2.2 TNF-α干预人脐静脉内皮细胞方案
        2.2.3 人脐静脉内皮细胞观察
        2.2.4 ELISA测定蛋白含量
        2.2.5 细胞总蛋白的提取
        2.2.6 Western Blot测定蛋白含量
        2.2.7 统计方法
    2.3 试验结果与讨论
        2.3.1 人脐静脉内皮细胞的培养和鉴定
        2.3.2 不同浓度TNF-a对细胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的变化
        2.3.3 TNF-ct刺激不同时间对细胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的变化
    2.4 本章小结
    参考文献
第三章 氯化锦葵色素对TNF-α诱导的HUVEC中趋化因子及粘附因子的调节作用
    3.1 材料
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验试剂
        3.1.3 试验仪器
        3.1.4 试剂配置
    3.2 试验方法
        3.2.1 人脐静脉内皮细胞复苏、培养及传代
        3.2.2 试验分组
        3.2.3 MTT法检测细胞活力
        3.2.4 ELISA法测定蛋白含量
        3.2.5 Western Blot测定细胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白含量
        3.2.6 细胞总RNA提取
        3.2.7 RT-PCR反应
        3.2.8 PCR扩增
        3.2.9 检验cDNA及引物质量
        3.2.10 荧光定量PCR
        3.2.11 统计方法
    3.3 试验结果与讨论
        3.3.1 MTT法检测不同浓度Mv-Cl对HUVEC的保护作用
        3.3.2 Mv-Cl对细胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影响
        3.3.3 Mv-Cl对细胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表达影响
        3.3.4 Mv-Cl对细胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表达影响
    3.4 本章小结
    参考文献
第四章 糖苷氯化锦葵色素对TNF-α诱导的HUVEC中趋化因子及粘附因子的调节作用
    4.1 材料
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 试验试剂
        4.1.3 试验仪器
        4.1.4 试剂配置
    4.2 试验方法
    4.3 试验结果与讨论
        4.3.1 MTT法检测不同浓度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对HUVEC的保护作用
        4.3.2 不同浓度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影响
        4.3.3 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl对细胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表达影响
        4.3.4 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl对细胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表达影响
    4.4 本章小结
    参考文献
第五章 氯化锦葵色素-3-葡萄糖苷及半乳糖苷对TNF-α诱导的HUVEC中趋化因子及粘附因子的糖苷协同作用及分子机理的研究
    5.1 材料
        5.1.1 试验材料
        5.1.2 试验试剂
        5.1.3 试验仪器
        5.1.4 试剂配置
    5.2 试验方法
    5.3 试验结果及讨论
        5.3.1 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影响
        5.3.2 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的影响
        5.3.3 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞中MCP-1及ICAM-1mRNA的影响
        5.3.4 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞中IκBα蛋白的影响
        5.3.5 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl对细胞中NF-κB蛋白的影响
    5.4 本章小结
    参考文献
全文总结
致谢
硕士期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]原花青素对Ⅱ型糖尿病大鼠心肌炎症因子影响[J]. 李飞,王国贤,康雅萍.  中国公共卫生. 2012(04)
[2]蓝莓的保健功能及其开发应用[J]. 王姗姗,孙爱东,李淑燕.  中国食物与营养. 2010(06)
[3]花青素的提取纯化、抗氧化能力及功用方面的研究进展[J]. 魏蕾,吕佳飞,李志洲.  氨基酸和生物资源. 2009(04)
[4]葡萄籽原花青素对H202诱导的脐静脉内皮细胞损伤的影响[J]. 高琳琳,李福荣,康莉,司艳红.  营养学报. 2009(04)
[5]卡托普利对胰岛素抵抗-高血压综合征大鼠TNF-α、NO和SOD水平的影响[J]. 杨威,肖柳英,潘竞锵,庆方,李杰.  中国药师. 2008(05)
[6]TNF-α信号传导通路的分子机理[J]. 丘创华,侯敢,黄迪南.  中国生物化学与分子生物学报. 2007(06)
[7]血管内皮细胞功能研究概况[J]. 温绍君,刘洁琳.  生殖医学杂志. 2005(05)
[8]原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NF-κB DNA结合活性的抑制作用[J]. 陈美珺,梁统,周克元.  广东医学院学报. 2005(02)
[9]IL-1β和TNF-α诱导RA成纤维样滑膜细胞ICAM-1和VCAM-1表达调控的机制研究[J]. 孙铁铮,吕厚山.  中华风湿病学杂志. 2005(03)
[10]我国蓝莓(越桔)栽培研究现状及发展措施[J]. 修英涛,常凤英,姜河,杨伟力,候利军.  辽宁农业科学. 2003(03)

博士论文
[1]薏苡仁酯抑制内皮细胞相关炎症因子之实验研究[D]. 许淳惟.广州中医药大学 2011

硕士论文
[1]蓝莓混汁的研制及渣的干燥[D]. 王银娟.江南大学 2006



本文编号：3091714