梓醇促进骨髓间充质干细胞的存活和VEGF分泌、以及在心肌梗死大鼠的心肌修复中的作用

发布时间：2021-04-04 19:22

　　目的:骨髓间充质干细胞移植被认为是一种安全有效的缺血性心脏病的治疗方法。越来越多的证据显示BMSCs移植对心肌梗死有疗效。但缺血、缺氧、炎症等导致移植细胞的存活率低,从而限制了其疗效。因此,促进骨髓间充质干细胞的增殖和存活对于提高骨髓间充质干细胞移植疗效具有重要作用。血管内皮生长因子（VEGF）是促进血管生成因子,促进血管内皮细胞的增殖、迁移和存活。有研究表明,VEGF在心肌梗死后可增加血流,改善心功能。而且,VEGF在心肌梗死后BMSCs移植中也起着关键作用。因此,调节VEGF的分泌可能会影响BMSCs移植的疗效。梓醇（Catalpol）是从中药地黄中分离出来的一种活性化合物,据报道具有广泛的生物学活性,包括降血糖、神经保护、抗衰老、抗肿瘤作用。此外,之前的一项研究表明梓醇可促进大鼠脑卒中模型中VEGF介导的血管生成。研究还表明,梓醇能促进多种细胞的存活和抑制细胞凋亡。根据上述背景,我们推测梓醇在心肌梗死中可能提高BMSCs的生存和VEGF的分泌、提高移植疗效。在这项研究中,我们探索梓醇能否保护BMSCs对抗缺氧缺血性损伤,以及移植到心肌梗死大鼠后,是否促进心肌梗死大鼠的疗效。研究方... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

BMSCs表型的鉴定

说明成功分离和培养骨髓间充质干细胞。3.2 梓醇对氧糖剥夺的 BMSCs 体外 VEGF 分泌的影响ELISA 检测各组的 BMSCs 分泌 VEGF 情况如下所示（图 1.2A，表 1.1）。细胞培养上清中 VEGF 的含量在氧糖剥夺刺激组明显增加，但是没有统计学意义；梓醇预处理的氧糖剥夺的 BMSCs 可以剂量依赖型的增加 VEGF 分泌。与 BMSCs+OGD组比较，BMSCs+ OGD+梓醇中组增加显著（##P<0.01），BMSCs+ OGD+梓醇高组增加极其显著（###P<0.001）。另外，Western Blot 检测各组细胞中 VEGF-A、HIF-1α 蛋白水平情况（图 1.2B-D，表 1.2）。HIF-1α 在细胞核和细胞浆均有表达，我们检测了细胞核HIF-1α和细胞总的HIF-1α蛋白的灰度表达情况，β-actin、HistoneH3、β-actin 为相对应的内参，HIF-1α 与内参相距较大，因此分开电泳。如图 1.2B-D 和表 1.2 所示，VEGF-A 在梓醇中、高浓度的氧糖剥夺的 BMSCs 组、总的 HIF-1α 蛋白水平在梓醇高浓度的氧糖剥夺 BMSCs 组显著上调。

11图 1.3 梓醇在氧糖剥夺条件下促进 BMSCs 体外存活图 1.3A 为 CCK-8 检测各组 BMSCs 活性 BMSCs+OGD 组较 BMSCs 组细胞活性显著降（ ***P<0.001），而与 BMSCs+OGD 组比较 ，BMSCs+OGD+Catalpol M 组和 BMSOGD+Catalpol H 组细胞活性上调（#P<0.05，##P<0.01）；图 1.3BC 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况 B 为流式检测细胞凋亡细胞分布散点图C 图为由流式凋亡检测得到的细胞凋亡百分比，由图可见，BMSCs+OGD 组细胞凋亡比例BMSCs 组细胞显著升高（***P<0.001），而与 BMSCs+OGD 组比较，梓醇处理后，所有组细凋亡比例降低极其显著（###P<0.001）；图 1.3D-G Western Blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白的表达情况 与 BMSCs 组比较BMSCs+OGD 组 Bcl-2 蛋白表达量显著降低（***P<0.001），Bax 和 cleaved caspase-3 蛋白表量显著升高（***P<0.001）；与 BMSCs+OGD 组比较，BMSCs+OGD+CatalpolM 组和 BMS


本文编号：3118336