细胞自噬在血液恶性肿瘤治疗中的作用和机制研究

发布时间：2021-04-07 08:32

　　本论文的工作分为以下两个部分：第一部分重组人精氨酸酶（rhArg）对非何杰金淋巴瘤的细胞毒性及细胞自噬在rhArg杀伤非何杰金淋巴瘤细胞中的作用研究近年来,靶向细胞代谢尤其是精氨酸代谢治疗肿瘤受到了大量关注。精氨酸酶是一种精氨酸降解酶,对多种恶性实体瘤均有杀伤效果。本课首次研究了rhArg对非何杰金淋巴瘤（NHL）细胞的细胞毒性。细胞自噬真核细胞内遗传保守的蛋白质降解途径,在维持细胞内环境稳态及细胞增殖、分化和死亡等过程中起重要作用,与肿瘤治疗息息相关。研究表明生长因子、氨基酸缺乏等外界刺激会诱导细胞自噬。但精氨酸酶能否诱导NHL细胞自噬尚未见报道,本课题首次研究了rhArg诱导NHL细胞自噬以及细胞自噬在rhArg杀伤NHL细胞中的作用和机制。选择NHL研究中最常用的细胞株Raji和Daudi作为体外模型。细胞经rhArg处理后,用MTT法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位；用电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体、western blot检测细胞自噬相关蛋白或细胞凋亡相关蛋白的表达。用siRNA沉默细胞凋亡调控基因caspase3、细胞自噬调控基因ATG5和B... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．?ｒｈＡｒｇ可通过耗竭精氨酸导致肿瘤细胞生长抑制??能降解精氨酸的酶包括精氨酸酶（ａｒｉｎａｓｅ）、精氨酸脱亚胺酶（ａｒｉｎｉｎｅ??

巧了抑制Ｈｈ信号通路对伊马替尼敏感或耐药的Ｂｃｒ－Ａｂｌ＋ＣＭＬ细胞生长的影响。??分别用３．３、１０和３０叫ＶＩ的ｖｉｓｍｏｄ巧化处理Ｋ５６２细胞２４?ｈ，收集细胞抽提??ＲＮＡ、将ＲＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ进行定量ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣ民分析。结果如图２－１所示，??１０和３０?｜ｌｉＭ的ｖｉｓｍｏｄｅｇ化能显著抑制Ｇｌｉｌ的表达。??Ｋ５６２??含如－下??＜?ＨＢ?Ｗ、：‘：??ｏｌｌｉｊ?ＢＭ??０?３．３?１０?３０??Ｖｉｓｍｏｄ巧化（ｙＭ）??图２－１?Ｖｉｓｍｏｄ巧化能有效抑制Ｂｃｒ－Ａｂ广ＣＭＬ细胞中Ｇｌｉｌ的ｍＲＮＡ表达??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｋ５６２?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｋｈ?３．３，１０，?ａｎｄ?３０?｜〇Ｍ?ｏｆ?ｖｉｓｍｏｄ巧化?ｆｂｒ?２４?ｈ，??ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｌｉｌ?ｗａｓ?ｄｅｌｅｔｅｄ?ｂｙ?ｑＲＴ－ＰＣＲ．?＊＊?ｖｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ，?Ｐ＜０．０１??将Ｋ５６２细胞分别用３．３、１０和３０?的ｖｉｓｍｏ＾ｇＡ处理Ｋ５６２细胞４８?ｈ后，??裂解细胞牧集蛋白，运用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法检测Ｇｌｉｌ蛋白表达水平。结果如图２－２??所示，１０和３０＾■ｌＭ的ｖｉｓｒｎｏｄ巧化能降低Ｇｌｉｌ的表达水平。切上结果共同表明，??１０和３０?的ｖｉｓｍｏｄ巧化能有效抑制ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路。??－４７－??

（ＡＳＳ）或鸟氨酸氨甲醜基转移酶（ＯＴＣ）的缺失，自身无法通过尿素循环合成??精氨酸，只能依赖外源性的精氨酸维持正常的生理功能［８，?９］。对于这类肿瘤细??胞，可运用精氨酸降解酶耗尽细胞所需的精氨酸从而导致细胞死亡（如图２）??－７－??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Generation and selection of immunized Fab phage display library against human B cell lymphoma[J]. Yongmei Shen1,2;Xiaochun Yang1;Ningzheng Dong3;Xiaofang Xie1,2;Xia Bai3;Yizhen Shi1,21 Department of Radioimmunoassay2 Department of Clinical Laboratory, Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215004, China3 Leukemia Research Unit, Jiangsu Institution of Hematology, First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzho 215006, China.  Cell Research. 2007(07)



本文编号：3123154