GDF11通过YME1L介导的OPA1动态平衡提高间充质干细胞治疗心肌梗死疗效
发布时间：2021-04-14 12:19
研究背景:急性心肌梗死是世界范围内死亡率最高、最危及生命的疾病之一。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是治疗心肌梗死最有前途的细胞类型之一,有临床前试验支持供体细胞越接近心脏表型修复心脏功能的疗效越好。然而,无论MSCs的来源如何,移植到心梗周边区的MSCs因心梗后恶劣环境而存活率很低,限制了MSCs在心梗治疗中的应用。转化生长因子11（growth differentiation factor 11,GDF11）是转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族中的一员,已被证实可以在缺血/再灌注模型中刺激血管祖细胞的增殖和血管生成,可通过调控线粒体生成或线粒体动力学参与骨骼肌细胞线粒体质量控制。而在心肌损伤治疗中GDF11是否可提高心脏来源的MSCs活性及治疗疗效有待进一步研究。线粒体完整性的维持在细胞抵抗凋亡中起着重要的作用,线粒体功能障碍导致分裂激活和融合失活。因此我们推测缺氧条件下GDF11可能通过维持线粒体动态稳定及完整性对MSCs起到抗凋亡保护作用。研究目的:在体内和体外模型中验证缺氧条件下...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MSCs的细胞形态及表面特异性标记物鉴定
浙江大学博士学位论文结果32图2缺氧不同时间点MSCs中GDF11蛋白表达量变化通过WesternBlot检测GDF11蛋白表达变化，β-actin作为内参，利用ImageLab软件分析条带灰度值进行统计定量分析(n=3)。数据以均数±标准差表示。*p＜0.05，与缺氧0小时相比。4.2体内动物模型实验4.2.1GDF11改善了心肌梗死周边区MSCs的抗凋亡能力我们通过过表达GDF11的慢病毒感染MSCs（MSCsLV-GDF11），同时将空载质粒病毒感染的MSCs（MSCsLV）作为对照组。慢病毒过表达GDF11基因感染MSCs48小时后，提取细胞总蛋白，通过WesternBlot检测证实，与空载病毒组相比，在过表达GDF11组的GDF11蛋白水平明显上调（图3A）。C57/BL6J小鼠构建心肌梗死模型后，在心梗周边区移植相同数量的MSCsLV-GDF11和MSCsLV（细胞数5×105/只）。术后3天取心脏组织提取RNA及行冰冻切片。荧光定量PCR及GFP免疫荧光染色观察到MSCsLV-GDF11组心梗周边区MSCs的驻留率更高（图3B-D）。
浙江大学博士学位论文结果33图3GDF11增强小鼠心梗模型中移植后的MSCs的驻留率。（A）慢病毒过表达GDF11基因感染MSCs48小时后，提取细胞总蛋白，Westernblot检测GDF11蛋白水平变化及统计分析，空载质粒病毒组（LV）作为对照组，β-actin作为内参。利用ImageLab软件分析条带灰度值进行统计定量分析(n=3)。（B）荧光定量PCR分析梗死心脏中GFP阳性细胞比例，两组各统计6只小鼠。（C，D）代表性GFP免疫荧光染色（C），蓝色代表细胞核，绿色代表GFP标记的MSCs。定量分析每个视野下GFP阳性的细胞个数（D），每个心脏切面至少观察9-10个视野，两组各统计6只小鼠样本。比例尺长度为100μm。数据以平均值±标准差表示，*p＜0.05，与LV/MSCsLV组相比。4.2.2移植过表达GDF11的MSCs可改善心肌梗死后心脏功能为了研究过表达GDF11的MSCs对心肌梗死后心脏功能的影响，构建小鼠心梗模型后，我们在心肌梗死周边区随机选取5处注射MSCs，包括慢病毒过表达GDF11的MSCs（MSCsLV-GDF11）和作为对照组的空载质粒病毒转染的MSCs（MSCsLV）。同时注射相同体积的DMEM作为阴性对照组。在小鼠术前1天，心梗后3、7、14、28天，利用经胸多普勒心脏超声检查评估各组小鼠心功能参数左
【参考文献】：
期刊论文
[1]Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy?[J]. Ann De Becker,Ivan Van Riet. World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[2]Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy[J]. Peng-Fei Qiao,Lei Yao,Xin-Chen Zhang,Guo-Dong Li,De-Quan Wu. World Journal of Gastroenterology. 2015(45)
[3]WJSC 6th Anniversary Special Issues（2）:Mesenchymal stem cells Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells:Their advantages and potential clinical utility[J]. Tokiko Nagamura-Inoue,Haiping He. World Journal of Stem Cells. 2014(02)
本文编号：3137306
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MSCs的细胞形态及表面特异性标记物鉴定
浙江大学博士学位论文结果32图2缺氧不同时间点MSCs中GDF11蛋白表达量变化通过WesternBlot检测GDF11蛋白表达变化，β-actin作为内参，利用ImageLab软件分析条带灰度值进行统计定量分析(n=3)。数据以均数±标准差表示。*p＜0.05，与缺氧0小时相比。4.2体内动物模型实验4.2.1GDF11改善了心肌梗死周边区MSCs的抗凋亡能力我们通过过表达GDF11的慢病毒感染MSCs（MSCsLV-GDF11），同时将空载质粒病毒感染的MSCs（MSCsLV）作为对照组。慢病毒过表达GDF11基因感染MSCs48小时后，提取细胞总蛋白，通过WesternBlot检测证实，与空载病毒组相比，在过表达GDF11组的GDF11蛋白水平明显上调（图3A）。C57/BL6J小鼠构建心肌梗死模型后，在心梗周边区移植相同数量的MSCsLV-GDF11和MSCsLV（细胞数5×105/只）。术后3天取心脏组织提取RNA及行冰冻切片。荧光定量PCR及GFP免疫荧光染色观察到MSCsLV-GDF11组心梗周边区MSCs的驻留率更高（图3B-D）。
浙江大学博士学位论文结果33图3GDF11增强小鼠心梗模型中移植后的MSCs的驻留率。（A）慢病毒过表达GDF11基因感染MSCs48小时后，提取细胞总蛋白，Westernblot检测GDF11蛋白水平变化及统计分析，空载质粒病毒组（LV）作为对照组，β-actin作为内参。利用ImageLab软件分析条带灰度值进行统计定量分析(n=3)。（B）荧光定量PCR分析梗死心脏中GFP阳性细胞比例，两组各统计6只小鼠。（C，D）代表性GFP免疫荧光染色（C），蓝色代表细胞核，绿色代表GFP标记的MSCs。定量分析每个视野下GFP阳性的细胞个数（D），每个心脏切面至少观察9-10个视野，两组各统计6只小鼠样本。比例尺长度为100μm。数据以平均值±标准差表示，*p＜0.05，与LV/MSCsLV组相比。4.2.2移植过表达GDF11的MSCs可改善心肌梗死后心脏功能为了研究过表达GDF11的MSCs对心肌梗死后心脏功能的影响，构建小鼠心梗模型后，我们在心肌梗死周边区随机选取5处注射MSCs，包括慢病毒过表达GDF11的MSCs（MSCsLV-GDF11）和作为对照组的空载质粒病毒转染的MSCs（MSCsLV）。同时注射相同体积的DMEM作为阴性对照组。在小鼠术前1天，心梗后3、7、14、28天，利用经胸多普勒心脏超声检查评估各组小鼠心功能参数左
【参考文献】：
期刊论文
[1]Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy?[J]. Ann De Becker,Ivan Van Riet. World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[2]Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy[J]. Peng-Fei Qiao,Lei Yao,Xin-Chen Zhang,Guo-Dong Li,De-Quan Wu. World Journal of Gastroenterology. 2015(45)
[3]WJSC 6th Anniversary Special Issues（2）:Mesenchymal stem cells Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells:Their advantages and potential clinical utility[J]. Tokiko Nagamura-Inoue,Haiping He. World Journal of Stem Cells. 2014(02)
本文编号：3137306
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