髓过氧化物酶对THP-1巨噬细胞活性及MMP-9、TIMP-1表达的影响
发布时间：2021-04-17 04:24
目的探讨髓过氧化物酶（MPO）对单核巨噬细胞（THP-1）、活性及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）表达的影响。方法 2018年12月-2019年3月于海口市人民医院暨湘雅医学院附属海口医院中心实验室进行实验,设THP-1为对照组、MPO低、中、高剂量组（MPO终浓度分别为1.5、3.0、6.0μ/L）,各组每孔设6个平行样,培养72 h。试验结束后,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光逆转录法（RT-PCR）及蛋白印迹法（WESTERN-BLOT）测定细胞MMP-9、TIMP-1基因和蛋白水平。结果与对照组比较,MPO低、中、高剂量组OD值、存活率水平明显升高（P<0.05）,且随着MPO剂量逐渐增加,各组OD值、存活率逐渐升高（P<0.05）。与对照组比较,MPO低、中、高剂量组凋亡率水平降低（P<0.05）,且随着MPO剂量逐渐增加,各组凋亡率逐渐降低（P<0.05）。与对照组比较,MPO低、中、高剂量组MMP-9 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,TIMP-1mRNA和蛋白表...
【文章来源】：新疆医科大学学报. 2020,43(04)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
各组THP-1巨噬细胞凋亡情况
动脉粥样硬化是全球过早死亡病例的主要原因。临床、遗传和流行病学证据表明,低密度脂蛋白(LDL)水平升高是应激的一个重要危险因素,而来自巨噬细胞的负载泡沫细胞是动脉粥样硬化的病理学标志。体外试验中,LDL未能将巨噬细胞转化为负载泡沫细胞,这说明LDL必须经过修饰才能发挥致病作用。氧化途径是改变LDL的一种重要机制,研究表明MPO与LDL氧化修饰密不可分[10]。MPO使由中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞群分泌的血红素蛋白。分子细胞学试验表明,由MPO-过氧化物系统体外修饰的LDL被巨噬细胞清道夫受体摄取;MPO存在于人类动脉粥样硬化组织中,与巨噬细胞共定位;这些观察结果提供了MPO活跃于人类动脉粥样硬化组织的强有力证据,LDL是其目标之一[11]。临床试验观察到,在冠状动脉疾病的受试者中,MPO的血液水平升高,其预测不稳定型心绞痛患者心肌梗死的风险;在体外降低MPO表达的启动子多态性与临床事件风险降低相关[12]。在小鼠动脉粥样硬化组织中的巨噬细胞用蛋白质印迹检测到高水平MPO。本研究结果显示,与对照组比较,MPO低、中、高剂量组OD值、存活率水平升高,且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组OD值、存活率明显升高。与对照组比较,MPO低、中、高剂量组凋亡率水平降低,且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组凋亡率明显降低。这与上述讨论一致,同时提示MPO可促进巨噬细胞增殖,抑制其凋亡。MMP-9前体可由单核细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞等多种细胞分泌。已有研究发现,MMP-9免疫染色主要集中于巨噬细胞,且在动脉粥样硬化斑块的肩部和泡沫细胞聚集的部位中MMP-9表达及分泌增加[13]。而单核-巨噬细胞等大量的炎症细胞浸润是易损斑块的特征之一,这说明MMP-9参与了动脉粥样硬化疾病的进展。而既往通过染色发现在破裂处存在大量MPO侵润,提示在不稳定斑块中同时存在大量的MPO与MMP-9。MMP-9在动脉粥样硬化斑块发展中起重要作用[14-15]。TIMP-1是MMP-9的抑制剂,在斑块不稳定性的调节中,如小鼠的敲除或过表达的研究中发现,TIMP-1腺病毒过表达导致动脉粥样硬化病变区域减少;腺病毒TIMP-1过表达能明显降低头臂动脉斑块的大小,由于斑块中弹性蛋白含量增加,表明向更稳定的斑块表型发生了变化[16]。TIMP-1过表达可以抑制动脉粥样硬化病变的形成,TIMP-1过表达导致体内MMPS活性显着降低,在小鼠静脉移植物中MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13其活性明显降低[17]。更重要的是,TIMP-1的过度表达导致静脉移植损伤大小减少,巨噬细胞和纤维蛋白含量减少,胶原和平滑肌细胞含量增加,最终导致斑块破裂并发症减少90%[18]。本研究结果显示,与对照组比较,MPO低、中、高剂量组MMP-9 mRNA和蛋白表达升高,TIMP-1mRNA和蛋白表达降低;且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组MMP-9 mRNA和蛋白表达水平明显升高,TIMP-1mRNA和蛋白表达明显降低。这说明,MPO可促进巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达,抑制TIMP-1mRNA和蛋白表达,进而加重动脉粥样硬化病变进展。
【参考文献】：
期刊论文
[1]天香丹对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠IL-6、IL-10表达的影响[J]. 王思静,张华,马学宽,邢科,徐亦男,安冬青. 新疆医科大学学报. 2019(07)
[2]抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎周围血中性粒细胞CD35表达的变化及意义[J]. 何倩,张蕾,郑美娟,帅宗文,陈珊宇,胡子盈. 中华风湿病学杂志. 2018 (04)
[3]氧化应激和自噬在动脉粥样硬化中的作用研究新进展[J]. 郝阳,郭晓辰,张军平. 中国动脉硬化杂志. 2017(04)
[4]动脉粥样硬化机制研究进展[J]. 王阳,米树华,杨关林. 中国医药. 2017 (04)
本文编号：3142802
【文章来源】：新疆医科大学学报. 2020,43(04)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
各组THP-1巨噬细胞凋亡情况
动脉粥样硬化是全球过早死亡病例的主要原因。临床、遗传和流行病学证据表明,低密度脂蛋白(LDL)水平升高是应激的一个重要危险因素,而来自巨噬细胞的负载泡沫细胞是动脉粥样硬化的病理学标志。体外试验中,LDL未能将巨噬细胞转化为负载泡沫细胞,这说明LDL必须经过修饰才能发挥致病作用。氧化途径是改变LDL的一种重要机制,研究表明MPO与LDL氧化修饰密不可分[10]。MPO使由中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞群分泌的血红素蛋白。分子细胞学试验表明,由MPO-过氧化物系统体外修饰的LDL被巨噬细胞清道夫受体摄取;MPO存在于人类动脉粥样硬化组织中,与巨噬细胞共定位;这些观察结果提供了MPO活跃于人类动脉粥样硬化组织的强有力证据,LDL是其目标之一[11]。临床试验观察到,在冠状动脉疾病的受试者中,MPO的血液水平升高,其预测不稳定型心绞痛患者心肌梗死的风险;在体外降低MPO表达的启动子多态性与临床事件风险降低相关[12]。在小鼠动脉粥样硬化组织中的巨噬细胞用蛋白质印迹检测到高水平MPO。本研究结果显示,与对照组比较,MPO低、中、高剂量组OD值、存活率水平升高,且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组OD值、存活率明显升高。与对照组比较,MPO低、中、高剂量组凋亡率水平降低,且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组凋亡率明显降低。这与上述讨论一致,同时提示MPO可促进巨噬细胞增殖,抑制其凋亡。MMP-9前体可由单核细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞等多种细胞分泌。已有研究发现,MMP-9免疫染色主要集中于巨噬细胞,且在动脉粥样硬化斑块的肩部和泡沫细胞聚集的部位中MMP-9表达及分泌增加[13]。而单核-巨噬细胞等大量的炎症细胞浸润是易损斑块的特征之一,这说明MMP-9参与了动脉粥样硬化疾病的进展。而既往通过染色发现在破裂处存在大量MPO侵润,提示在不稳定斑块中同时存在大量的MPO与MMP-9。MMP-9在动脉粥样硬化斑块发展中起重要作用[14-15]。TIMP-1是MMP-9的抑制剂,在斑块不稳定性的调节中,如小鼠的敲除或过表达的研究中发现,TIMP-1腺病毒过表达导致动脉粥样硬化病变区域减少;腺病毒TIMP-1过表达能明显降低头臂动脉斑块的大小,由于斑块中弹性蛋白含量增加,表明向更稳定的斑块表型发生了变化[16]。TIMP-1过表达可以抑制动脉粥样硬化病变的形成,TIMP-1过表达导致体内MMPS活性显着降低,在小鼠静脉移植物中MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13其活性明显降低[17]。更重要的是,TIMP-1的过度表达导致静脉移植损伤大小减少,巨噬细胞和纤维蛋白含量减少,胶原和平滑肌细胞含量增加,最终导致斑块破裂并发症减少90%[18]。本研究结果显示,与对照组比较,MPO低、中、高剂量组MMP-9 mRNA和蛋白表达升高,TIMP-1mRNA和蛋白表达降低;且随着MPO剂量逐渐增加,MPO各剂量组MMP-9 mRNA和蛋白表达水平明显升高,TIMP-1mRNA和蛋白表达明显降低。这说明,MPO可促进巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达,抑制TIMP-1mRNA和蛋白表达,进而加重动脉粥样硬化病变进展。
【参考文献】：
期刊论文
[1]天香丹对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠IL-6、IL-10表达的影响[J]. 王思静,张华,马学宽,邢科,徐亦男,安冬青. 新疆医科大学学报. 2019(07)
[2]抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎周围血中性粒细胞CD35表达的变化及意义[J]. 何倩,张蕾,郑美娟,帅宗文,陈珊宇,胡子盈. 中华风湿病学杂志. 2018 (04)
[3]氧化应激和自噬在动脉粥样硬化中的作用研究新进展[J]. 郝阳,郭晓辰,张军平. 中国动脉硬化杂志. 2017(04)
[4]动脉粥样硬化机制研究进展[J]. 王阳,米树华,杨关林. 中国医药. 2017 (04)
本文编号：3142802
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