多氯联苯醌通过诱导CAV1磷酸化和miR-7-5p的表达促进动脉粥样硬化形成的机制研究

发布时间：2021-04-21 08:55

　　多氯联苯（Polychlorinated biphenyls,PCBs）是一类典型的持久性有机污染物,由于其稳定的理化性质,在工业领域曾被广泛应用。虽然在二十世纪七十年代就开始被禁止生产,但PCBs在环境中极难分解,能够在生物体内大量富集,并代谢生成多氯联苯醌（Polychlorinated biphenyl quinones,PCBQs）类化合物,在机体中产生大量ROS,造成氧化应激,导致多种毒性效应。动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是冠心病和卒中的主要病因,近年来很多研究发现PCBs与心血管疾病的发生发展有着密切的关联,是诱导AS的危险因素之一。本文研究了PCBs典型的醌类代谢产物PCB29-pQ对AS的影响及其作用的分子机制。第一部分:该部分旨在研究PCB29-pQ对动脉粥样硬化的形成产生的影响。通过高脂饲养ApoE^-/-小鼠构建动脉粥样硬化模型并用PCB29-pQ干预。动物随机分为对照组和PCB29-pQ组,同时高脂饲养,PCB29-pQ组每周一次腹腔注射玉米油溶解的PCB29-pQ,对照组给予等量的玉米油。给药10周后,取小鼠主动脉进... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号对照表
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 多氯联苯
        1.2.1 多氯联苯的结构和性质
        1.2.2 多氯联苯的国内外污染现状
        1.2.3 多氯联苯的暴露与毒性
        1.2.4 多氯联苯的代谢
    1.3 小窝蛋白caveolin-1
        1.3.1 caveolin-1的结构
        1.3.2 caveolin-1的功能
    1.4 microRNA的特点和作用方式
    1.5 动脉粥样硬化的发病机制
        1.5.1 炎症与动脉粥样硬化
        1.5.2 凋亡与动脉粥样硬化
        1.5.3 非编码RNA与动脉粥样硬化
    1.6 持久性有机污染物与动脉粥样硬化的关系
    1.7 立体依据及意义
-/-小鼠动脉粥样硬化形成">第二章 PCB 29-pQ加速ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化形成
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 小鼠动脉粥样硬化模型建立及PCB 29-pQ干预
        2.3.2 小鼠取材
        2.3.3 主动脉整体油红0染色
        2.3.4 HE染色
        2.3.5 免疫荧光组化
        2.3.6 组织TUNEL实验
        2.3.7 统计学分析
    2.4 实验结果
-/-小鼠主动脉斑块面积的影响">        2.4.1 PCB 29-pQ对ApoE^-/-小鼠主动脉斑块面积的影响
-/-小鼠主动脉的聚集">        2.4.2 PCB 29-pQ诱导巨噬细胞在ApoE^-/-小鼠主动脉的聚集
-/-小鼠主动脉内皮细胞凋亡">        2.4.3 PCB 29-pQ诱导ApoE^-/-小鼠主动脉内皮细胞凋亡
    2.5 讨论
第三章 PCB 29-pQ通过CAV1磷酸化诱导内皮细胞炎症反应和动脉粥样硬化的形成
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验细胞株
        3.2.3 实验仪器
        3.2.4 实验试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养与处理
        3.3.2 动物分组
        3.3.3 细胞总蛋白提取与定量
        3.3.4 Western Blot实验
        3.3.5 细胞免疫荧光实验
        3.3.6 免疫共沉淀实验
        3.3.7 单核细胞黏附实验
        3.3.8 siRNA转染
        3.3.9 油红O染色
        3.3.10 HE染色
        3.3.11 免疫组化
        3.3.12 酶联免疫吸附实验
        3.3.13 活性氧（ROS）检测
        3.3.14 统计分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 PCB 29-pQ激活内皮细胞的炎症反应
        3.4.2 CAV1磷酸化参与PCB 29-pQ诱导的炎症反应
        3.4.3 CAV1与eNOS的相互作用影响PCB 29-pQ诱导的炎症反应
        3.4.4 PCB 29-pQ通过CAV1磷酸化诱导TLR4结合到CAV1
        3.4.5 PCB 29-pQ通过CAV1磷酸化诱导IRAK1从CAV1解离
        3.4.6 敲除CAV1抑制PCB 29-pQ诱导动脉粥样硬化形成
-/-小鼠主动脉炎症因子表达">        3.4.7 敲除CAV1抑制PCB 29-pQ诱导的ApoE^-/-小鼠主动脉炎症因子表达
    3.5 讨论
第四章 PCB 29-pQ通过调控miR-7-5p诱导HUVECs的凋亡和动脉粥样硬化的形成
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验动物
        4.2.2 细胞株
        4.2.3 实验仪器
        4.2.4 实验试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 小鼠动脉粥样硬化模型建立及PCB 29-pQ干预
        4.3.2 细胞培养
        4.3.3 核酸原位杂交
        4.3.4 细胞microRNA测序
        4.3.5 细胞存活率实验
        4.3.6 蛋白提取和Western blot实验
        4.3.7 血管生成实验
        4.3.8 流式细胞术检测细胞凋亡
        4.3.9 线粒体膜电位（JC-1）检测
        4.3.10 miRNA mimics/inhibitor转染
        4.3.11 双荧光素酶报告基因实验
        4.3.12 生物信息学分析
        4.3.13 统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 PCB 29-pQ抑制HUVECs血管生成并诱导细胞凋亡
        4.4.2 PCB 29-pQ改变HUVECs中microRNA和mRNA的表达
        4.4.3 干扰miR-7-5p后影响PCB 29-pQ诱导的内皮细胞损伤
        4.4.4 miR-7-5p靶向作用于PPME1和TGF-β2
        4.4.5 干扰PPME1和TGF-β2影响PCB 29-pQ诱导的细胞凋亡
-/-小鼠主动脉miR-7-5p,下调PPME1和TGF-β2的表达">        4.4.6 PCB 29-pQ上调ApoE^-/-小鼠主动脉miR-7-5p,下调PPME1和TGF-β2的表达
    4.5 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者攻读硕士学位期间已发表科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]多氯联苯（PCBs）污染现状分析[J]. 胡芳,许振成.  广东化工. 2012(01)



本文编号：3151457