piR-960调控心肌细胞肥大的功能研究

发布时间：2021-05-15 06:33

　　目的心血管疾病一直是引起中老年人死亡的主要因素之一,在如高血压或心脏收缩壁应力增加等病理刺激下就会导致心肌肥厚,心肌肥厚是健康心脏超负荷工作时的一种生理性、代偿性和适应性反应,持续性心肌肥厚可导致心力衰竭,但其潜在的病理机制尚不完全明了。piRNA（piwi-interacting RNA）是一类新型非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）,因能够与piwi蛋白相互作用而命名,其功能涉及表观遗传状态的调控、基因组完整性的维持和干细胞功能的维持,在癌症等疾病中发挥调控作用,但是目前有关piRNA调节心脏疾病的报道还比较少。我们前期的预实验对小鼠用血管紧张素II（AngiotensinII,AngⅡ）刺激诱导心肌肥厚模型,通过piRNA测序发现与对照组小鼠相比,AngⅡ处理组心脏有多个piRNA呈现差异表达,通过实验验证piRNA测序结果发现piR-960差异表达最显著且在心脏组织中特异表达,暗示piRNA有可能参与心肌细胞肥大的调控。因此,为了揭示piR-960是否能够调控心肌细胞肥大,我们拟在细胞水平及动物水平研究piR-960调节心肌肥厚的功能,为预防和治疗心肌肥厚相... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
2 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 实验仪器与设备
    2.3 实验耗材与试剂
    2.4 乳鼠原代心肌细胞的分离培养所需试剂及方法
        2.4.1 试剂配制
        2.4.2 实验步骤
    2.5 测定细胞表面积
    2.6 动物实验
        2.6.1 小动物超声心动
        2.6.2 获取小鼠心脏组织样本
        2.6.3 小鼠体重(BW)和心脏质量(HW)称量
    2.7 HE染色冰冻切片
    2.8 WGA-FITC染色
    2.9 细胞转染
    2.10 RNA的提取、逆转录及PCR
        2.10.1 RNA的提取
        2.10.2 RNA的质量检测与标准化
        2.10.3 逆转录
        2.10.4 实时荧光定量聚合酶链式反应
    2.11 统计学方法
3 结果
    3.1 piRNA的筛选
    3.2 AngⅡ诱导心肌细胞发生肥大
    3.3 细胞水平过表达piR-960能够促进细胞肥厚标记物的表达
    3.4 细胞水平过表达piR-960能够增大心肌细胞表面积
    3.5 体外敲低pi R-960 能够抑制AngⅡ引起的肥厚标记物表达升高
    3.6 体外敲低pi R-960 能够抑制AngⅡ引起的心肌细胞表面积增大
    3.7 体内水平敲低piR-960对小鼠的心功能无明显影响
    3.8 体内敲低pi R-960 能够抑制AngⅡ诱导的心脏表型肥大和心脏体重比的增加
    3.9 体内敲低pi R-960 能够抑制AngⅡ引起的心肌肥厚
    3.10 体内敲低pi R-960 能够缓解AngⅡ引起的心功能降低
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表(附录)
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]piRNA抑制基因转座的分子机制[J]. 刘启鹏,安妮,岑山,李晓宇.  遗传. 2018(06)
[2]PIWI proteins and their interactors in piRNA biogenesis,germline development and gene expression[J]. Hsueh-Yen Ku,Haifan Lin.  National Science Review. 2014(02)



本文编号：3187140