新型心肌靶向AAV9-抗RyR2胞内抗体的心衰防治作用及其机理研究

发布时间：2021-06-05 18:08

　　目的:构建具有心脏特异性表达的重组腺相关病毒（rAAV9-AR185-EGFP和rAAV9-AR117-EGFP）,并制备rAAV9-AR185-EGFP和rAAV9-AR117-EGFP两种病毒制剂,检测在大鼠体内的转染效果。建立大鼠心力衰竭模型,通过腺相关病毒载体携带的胞内抗体改变大鼠心脏中RyR2蛋白的磷酸化水平,研究AR185抗体对大鼠心脏功能和结构的影响,探讨使用胞内抗体治疗心衰的可能性。研究AR185抗体对大鼠单个心肌细胞的钙稳态和收缩功能的保护作用,进一步探讨RyR2蛋白过度磷酸化在心衰病理过程中的作用和影响机制。方法:以课题组前期筛选获得的AR185抗体为目的基因,以重组9型腺相关病毒（rAAV9）为载体,构建相应的rAAV9-AR185-EGFP穿梭质粒。体外转染293T细胞制备病毒制剂,通过尾静脉注射的方式在大鼠体内转染AAV9-AR185-EGFP并检测其体内转染效果。建立动物模型,进行实验分组,将大鼠分成4组。分别是Sham组（n=7）,开胸后缝合,尾静脉注射生理盐水;HF组（n=7）,进行心梗手术（结扎大鼠心脏冠脉左前降支）,尾静脉注射生理盐水;AAV-AR1... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

AAV-AR185载体结构示意图

新型心肌靶向 AAV9-抗 RyR2 胞内抗体的心衰防治作用表 1-1 实时荧光定量 PCR 检测 Ct 值称 Ct1 Ct2 C6.42 6.66 6.9.18 9.48 9.12.61 12.57 1215.51 15.59 1517.82 17.55 17R185 10.93 10.97 10R117 10.64 10.58 10各梯度稀释标准品荧光 Ct 结果为纵坐标数值，样品拷贝数的 lg 值出标准曲线，获得标准曲线的函数公式 y=-2.851x+32.296，如图

观察心脏冰冻切片绿色荧光蛋白表达情况（图1-4），证明我们制备获得的病毒制剂能够转染大鼠心脏，可以有效的完成后续实验。图 1-4 心脏冰冻切片荧光图像四、实验讨论心力衰竭是一种对人类生命健康具有极大威胁的疾病，在全球医疗卫生事业中，心脏疾病的临床研究和预防保健都处在较高优先级别。目前，全世界心力衰竭患者人

【参考文献】：
期刊论文
[1]胞内抗体研究进展及临床应用前景[J]. 吴标,赵国屏,王颖.  现代免疫学. 2012(04)
[2]腺相关病毒（AAV）载体研究进展[J]. 赵丽琴,席斌,彭华松.  生物技术进展. 2012(02)
[3]钙漏流与心律失常[J]. 陈金玉,刘杰.  岭南心血管病杂志. 2011(06)
[4]实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用[J]. 刘小荣,张笠,王勇平.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(02)
[5]重组9型腺相关病毒载体转染小鼠心脏及对心功能的影响[J]. 向阳,马依彤,杨毅宁,陈邦党,刘芬,高霞,杜雷,苗娜.  中华微生物学和免疫学杂志. 2009 (10)
[6]横纹肌肌浆网Ca2+释放通道的调节[J]. 余志斌,袁超.  心脏杂志. 2009(04)
[7]Ryanodine受体与心力衰竭[J]. 杨泉,盖鲁粤,何昆仑.  现代诊断与治疗. 2008(01)
[8]大鼠心肌梗死后心力衰竭模型的建立和评估[J]. 田颖,王江,李振魁,祝善俊,聂凌,宋熔.  心脏杂志. 2006(04)



本文编号：3212649