Circ-RHOJ.1竞争性抑制miR-124-3p调控NRG-1影响心肌缺血/再灌注损伤的机制研究
发布时间：2021-06-09 00:28
目的心肌缺血再灌注（Ischemia/Reperfusion,I/R）损伤指发生于心肌梗死后,血流再灌注时出现心肌损伤加重的现象。心肌I/R损伤是心功能障碍和心肌细胞死亡的主要原因。非编码RNA广泛参与调控心肌I/R损伤介导的心肌细胞凋亡过程,而环状RNA（Circular RNAs,circRNAs）作为结构稳定、表达丰度高的一类非编码RNA,其潜在参与心肌I/R损伤的分子机制目前尚不完全清楚。探索心肌I/R损伤的潜在新病理机制,预防、减少心肌I/R损伤是目前临床亟待解决的重要问题。实验方法第一部分:提取大鼠乳鼠原代心肌细胞,采用心肌肌钙蛋白T（cTnT）抗体,应用细胞免疫荧光（Immunofluorescence,IF）方法鉴定SD大鼠心肌细胞。随后,对原代心肌细胞进行体外I/R处理,采用实时定量PCR（qPCR）方法检测 circ-RHOJ.1、miR-124-3p 和神经调节蛋白 1（neuregulin-1,NRG-1）的 RNA表达水平;同时,使用蛋白质免疫印迹法（Western blot,WB）和IF法检测NRG-1的蛋白表达水平与细胞定位。进一步构建大鼠体内心肌I/R损...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．环状ＲＮＡｓ的生成机制??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１．?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｃｉｒｃＲＮＡｓ??Ａ，基因组ＤＮＡ转录后，ｐｒｅ－ｍＲＮＡ通过经典剪接途径生成线性ＲＮＡ
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第二章?ｃｉｒｃ－ＲＨＯＪ．ｌ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ与ＮＲＧ－１在心肌缺血再灌注损伤中的表达??２．３实验结果??２．３．１分离和鉴定大鼠心肌细胞??采取胰蛋白酶消化，差速贴壁离心法分离心肌细胞。显微镜下观察心肌细??胞呈圆形或楠圆形。大约２４小时后，大部分心肌细胞已经贴壁，细胞伪足逐渐??地延伸。贴壁细胞的形态不规则，多见多边形和三角形的细胞。３天后，细胞??形成树突连接的簇状结构（图２－１Ａ）。细胞免疫荧光结果显示，心肌肌钙蛋白??（ｃＴｎＴ）表达水平高，主要定位于提取心肌细胞的细胞质中，符合心肌细胞的??染色特征（图２－１Ｂ）。??ＨＢｉｌｌｌ??Ｂ?ｃＴｎＴ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅｄ??ＳＭＢ??图２－１．分离鉴别大鼠心肌细胞??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒａｔ?ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ．??Ａ，第１、２、３天分别在显微镜下观察提取的大鼠心肌细胞形态。标尺，５０，。??Ｂ，釆用免疫荧光法检测提取的大鼠心肌细胞中ｃＴｎＴ的细胞定位和表达水平。??ｃＴｎＴ为绿色，细胞核为蓝色（ＤＡＰＩ）。标尺，ｌＯｆｉｍ。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂质载体前列腺素E1对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用[J]. 王凌燕,蔡高军,孙文伟,王文志. 中国实验诊断学. 2006(03)
本文编号：3219528
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．环状ＲＮＡｓ的生成机制??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１．?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｃｉｒｃＲＮＡｓ??Ａ，基因组ＤＮＡ转录后，ｐｒｅ－ｍＲＮＡ通过经典剪接途径生成线性ＲＮＡ
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第二章?ｃｉｒｃ－ＲＨＯＪ．ｌ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ与ＮＲＧ－１在心肌缺血再灌注损伤中的表达??２．３实验结果??２．３．１分离和鉴定大鼠心肌细胞??采取胰蛋白酶消化，差速贴壁离心法分离心肌细胞。显微镜下观察心肌细??胞呈圆形或楠圆形。大约２４小时后，大部分心肌细胞已经贴壁，细胞伪足逐渐??地延伸。贴壁细胞的形态不规则，多见多边形和三角形的细胞。３天后，细胞??形成树突连接的簇状结构（图２－１Ａ）。细胞免疫荧光结果显示，心肌肌钙蛋白??（ｃＴｎＴ）表达水平高，主要定位于提取心肌细胞的细胞质中，符合心肌细胞的??染色特征（图２－１Ｂ）。??ＨＢｉｌｌｌ??Ｂ?ｃＴｎＴ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅｄ??ＳＭＢ??图２－１．分离鉴别大鼠心肌细胞??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒａｔ?ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ．??Ａ，第１、２、３天分别在显微镜下观察提取的大鼠心肌细胞形态。标尺，５０，。??Ｂ，釆用免疫荧光法检测提取的大鼠心肌细胞中ｃＴｎＴ的细胞定位和表达水平。??ｃＴｎＴ为绿色，细胞核为蓝色（ＤＡＰＩ）。标尺，ｌＯｆｉｍ。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂质载体前列腺素E1对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用[J]. 王凌燕,蔡高军,孙文伟,王文志. 中国实验诊断学. 2006(03)
本文编号：3219528
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