AMPK激活通过负性调控C/EBPβ抑制小鼠心脏成纤维细胞TGFβ1表达

发布时间：2021-06-09 10:30

　　腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）激活具有抗纤维化的作用,但其具体机制仍不十分清楚。本研究拟在心脏成纤维细胞中,明确AMPK激活对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）引起的转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGFβ1）表达的作用及其具体机制。分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞,酶联免疫吸附实验检测TGFβ1蛋白表达,免疫印迹实验检测AMPK活性和CCAAT/增强子结合蛋白β（CCAAT/enhancer-binding proteinβ,C/EBPβ）表达,双荧光素酶报告基因实验检测TGFβ1转录活性。结果显示,给予AMPK激活剂AICAR预处理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1产生增加,这一抑制作用可被AMPK抑制剂Compound C逆转。生物信息学分析显示在小鼠Tgfb1启动子区存在C/EBPβ转录因子可能的结合位点。双荧光素酶报告基因实验表明,对于转染Tgfb1启动子区序列质粒的小鼠胚胎成纤维细胞,AngⅡ可以增加TGFβ1转录活性;但是对于转染缺失C/EBPβ结合位点的... 

【文章来源】：生理学报. 2017,69(02)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂
    1.2 成年小鼠心脏成纤维细胞的分离及培养(在无菌条件下操作)
    1.3 小鼠胚胎成纤维细胞的分离及培养(在无菌条件下操作)
    1.4 Western blot
    1.5 酶联免疫吸附实验(ELISA)
    1.6 结合位点预测
    1.7双荧光素酶报告基因检测
    1.8 数据分析
2 结果
    2.1 AMPK激动剂AICAR抑制Ang II引起的TGFβ1表达
    2.2 AICAR与Compound C对成年小鼠心脏成纤维细胞AMPK活性的影响
    2.3 C/EBPβ介导Ang II引起的TGFβ1转录表达
    2.4 AICAR抑制Ang II引起的C/EBPβ表达
3 讨论



本文编号：3220416