核呼吸因子-1基因的克隆，真核表达及鉴定

发布时间：2021-06-13 18:57

　　目的：克隆NRF-1基因，并对NRF-1基因进行生物信息学分析，了解其基本结构和蛋白分子特征，及NRF-1与相关蛋白分子的作用关系，为后续研究NRF-1的功能及在心力衰竭的心肌细胞中作用机制提供实验支持和研究思路。构建NRF-1重组慢病毒，并感染大鼠心肌细胞（H9c2（2-1）细胞），然后筛选出稳定上调表达NRF-1的阳性转染H9c2（2-1）细胞，为今后研究NRF-1基因对衰竭心肌细胞的调节作用及后续的基因治疗打下基础。方法：1.NRF-1的生物信息学分析：通过在线软件EXPASY， PSSFinder，PSITE，SignalP，Swiss-model，STRING对NRF-1的氨基酸构成，蛋白质二级结构，蛋白质修饰位点，信号肽，三维结构，以及与相关蛋白之间的作用关系进行分析预测。2.NRF-1基因的克隆与鉴定：2.1NRF-1基因的克隆：通过生物合成与重叠延伸PCR技术克隆NRF-1基因，并重组于载体pMD18-T，然后转化至感受态大肠杆菌（E.coil DH5）；2.2NRF-1基因的鉴定：PCR及测序鉴定重组质粒NRF-1/pMD18-T序列正确性。3.构建NRF-1重组慢病... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pMD18-Tvector简单结构图谱

名称 数目 比例 名称 数目 比例Ala (A) 75 14.0%Arg (R) 18 3.4%Asn (N) 14 2.6%Asp (D) 25 4.7%Cys (C) 3 0.6%Gln (Q) 39 7.3%Glu (E) 39 7.3%Gly (G) 33 6.2%His (H) 14 2.6%Ile (I) 21 3.9%Leu (L) 32 6.0%Lys (K) 28 5.2%Met (M) 12 2.2%Phe (F) 11 2.1%Pro (P) 26 4.9%Ser (S) 35 6.6%Thr (T) 47 8.8%Trp (W) 7 1.3%Tyr (Y) 10 1.9%Val (V) 45 8.4%Pyl (O) 0 0.0%Sec (U) 0 0.0%表 2 NRF-1 氨基酸组成

2.2 重组质粒 NRF-1/pMD18-T 中 NRF-1 基因序列鉴定：重组质粒分三段测定，测序质量较高，序列比对结果和测序峰图截图见图 5。插入序列经过与 GenBank 上 NRF-1（ NM 001100708.1）序列比对，显示序列一致。

【参考文献】：
期刊论文
[1]心肌代谢重构的研究进展[J]. 宋熔,祝善俊.  中华高血压杂志. 2008(03)
[2]代谢重构与慢性心力衰竭[J]. 祝善俊.  中华老年心脑血管病杂志. 2007(06)
[3]哺乳动物核呼吸因子研究进展[J]. 宋熔,柳君泽.  生理科学进展. 2005(02)

博士论文
[1]核呼吸因子基因的克隆表达及单克隆、多克隆抗体的制备[D]. 李锴男.第四军医大学 2008



本文编号：3228130