闭塞性血管病中血管紧张素Ⅱ受体与内皮素-1受体结构诱导突变的研究

发布时间：2021-06-20 17:46

　　目的闭塞性血管病是一种常见的周围血管慢性闭塞性炎症病变,在器官移植性血管病、肺动脉高压、系统性硬化病的病理过程中均有表现。研究已经表明,血管紧张素II受体与内皮素-1受体在闭塞性血管病的病理进程中起到关键性作用。同时,同样作为G蛋白偶联受体,血管紧张素II受体与内皮素-1受体的胞外环结构在受体激活过程中扮演着重要角色。血管紧张素II1型（Angiotensin II type 1）和内皮素-1 A型（Endothelin-1 type A）受体的抗体被认为是免疫介导的闭塞性血管病,如移植排斥反应（graft rejection）和系统性硬化症（SSC）的自身抗体,这些抗体可诱发强效且长期的内源性配体激活过程。AT1R和ETAR两种受体有着高度相似的二级结构,这提示在免疫和内源性刺激作用于这两种受体时,很可能存在着不同的作用位点。为了进一步研究。AT1R和ETAR两种受体的单独和相互作用机制,我们将建立一种基于基因工程酵母菌的G蛋白偶联受体（GPCR）激活分析模型,在这一模型上,AT1R和ETAR两种受体可获得独立的表达。我们将以此为基础研究免疫刺激对其受体结构的影响。我们将利用基因定点... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 闭塞性血管病变
        1.1.1 临床表现
        1.1.2 免疫介导的闭塞性血管病病理过程
            1.1.2.1 移植排斥反应与闭塞性血管病
            1.1.2.2 闭塞性血管病变与系统性硬化症（SSC）
    1.2 血管活性肽与闭塞性血管病
        1.2.1 血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）
            1.2.1.1 血管紧张素Ⅱ的生成
            1.2.1.2 血管紧张素Ⅱ与闭塞性血管病变
        1.2.2 内皮素-1（ET-1）
            1.2.2.1 内皮素-1 的生成
            1.2.2.2 内皮素-1（ET-1）与闭塞性血管病变的关系
    1.3 血管紧张素Ⅱ和内皮素-1 的G蛋白偶联受体（GPCRs）
        1.3.1 血管紧张素Ⅱ受体
            1.3.1.1 血管紧张素Ⅱ 1 型受体（AT_1R）的结构
            1.3.1.2 AT_1R和其他GPCRs之间的相互作用
        1.3.2 内皮素-1 受体
            1.3.2.1 内皮素-1 A型受体（ET_AR）的结构
            1.3.2.2 ET_AR和其他GPCRs之间的相互作用
    1.4 在免疫介导的闭塞性血管病变疾病中自身抗体的作用
        1.4.1 器官移植与AT_1R-Abs和ET_AR-Abs间的关联
            1.4.1.1 心脏移植与AT_1R-Abs和ET_AR-Abs
            1.4.1.2 肾脏移植与AT_1R-Abs和ET_AR-Abs
        1.4.2 系统性硬化症（SSc）与AT_1R-Abs和ET_AR-Abs
    1.5 研究目标
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.0 试剂
        2.1.1 试剂盒
        2.1.2 质粒、细菌和酶
        2.1.3 激动剂和拮抗剂
        2.1.4 缓冲溶液配方
        2.1.6 引物设计
        2.1.7 培养基
    2.2 方法
        2.2.1 基因定点突变
            2.2.1.1 cDNA片段的PCR扩增
            2.2.1.2 载体的构建
            2.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳
            2.2.1.4 提纯酶切后的载体
            2.2.1.5 将克隆扩增的DNA片段插入载体
            2.2.1.6 细菌转化
            2.2.1.7 质粒的小量抽提
            2.2.1.8 DNA测序和比对
            2.2.1.9 质粒的大量抽提
        2.2.2 G蛋白偶联受体激活试验
    2.3 统计学处理
第三章 结果
    3.1 免疫刺激对受体结构的影响研究
    3.2 在GPCR激活分析实验中，人类AT_1和ET_A受体的表达
    3.3 基因定点突变技术对受体胞外第2个环（ECL2）交换的结果分析
    3.4 免疫刺激对突变受体胞外第2环（ECL2）的作用效果
第四章 讨论
    4.1 主要结论
    4.2 讨论
    4.3 研究不足与展望
参考文献
综述
    参考文献
在学期间的研究成果
致谢
缩略词表


【参考文献】：
期刊论文
[1]The angiotensin Ⅱ type 1 receptor and receptor-associated proteins[J]. GUO DENG FU, YU LIN SUN, PAVEL HAMET, TADASHI INAGAMI Research Centre, Hotel-Dieu of CHUM and Department of Medicine, University of Montreal, Montreal, Quebec, Canada H2W 1T8 Department of Biochemistry, Vanderbilt University, School of Medicine, Nashville.  Cell Research. 2001(03)



本文编号：3239650