肾胺酶对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究

发布时间：2021-07-09 15:25

　　目的：研究在心肌肾胺酶缺乏、肾胺酶正常表达及肾胺酶重组蛋白预处理三种条件下,SD大鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤、细胞凋亡程度及组织肾胺酶表达变化,初步探索肾胺酶在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其可能机制。方法：1.细胞实验：慢病毒载体介导的肾胺酶基因沉默干扰序列（LV-Rnls-RNAi）转染H9C2心肌细胞,运用QPCR及、Vestern-Blot方法鉴定肾胺酶基因表达抑制效率,筛选出对肾胺酶基因有高效抑制的靶序列。2.SD大鼠心肌细胞肾胺酶基因沉默模型建立：15只SPF级雄性10周龄SD大鼠（280-320g）,平均随机分为5组（分别为Od组、4d组、7d组、10d组、14d组）；除基线组（Od组）外,每只大鼠心包腔注射100u1方法1中筛选出的滴度为1E+8TU/ml的慢病毒,分别在第0天（Od组）、4天（4d组）、7天（7d组）、10天（10d组）、14天（14d组）处死对应各组大鼠,QPCR及Western-Blot方法鉴定心肌肾胺酶表达,选取最佳感染时间。3.心肌缺血再灌注（I/R）损伤模型：36只SPF级雄性10w龄SD大鼠（280-320g）,平均随机分为6组,分别为肾... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞蛋白浓度测定蛋白浓度标准曲线

南大学硕士学位论文 2慢病毒载体介导的肾胺酶基因沉默效率鉴定(无± 5")表示，两组间均数比较采用t检验，组间比较采用One-WayANOVA析，多组内两两比较采用S-N-K法，设定检验水准为0.05，P<0.05为有统计意义；采用Graphpad Prism 6.01软件作图。.3结果.3.1慢病毒载体信息基因名称：renalase物种：大鼠载体名称：GV118 元件序列：U6-MCS-Ubi-EGFP载体图谱：

图2-10转染后细胞计数感染效率数5个视野焚光细胞占总细胞比例，各组间转染效率均大于90%,组间差异无统计，P>0.05。PCR鉴定转染后各组肾胺酶基因表达情况过细胞转染后计数，结果显示各组转染效率接近均在90%以上，考虑慢达慢，转染后第5天，提取RNA行PCR检测，经PCR鉴定，转染各组性病毒组抑制效率分别为63.47%、32.69%> 93.66%。各转染组相对正常细胞Rnls基因表达 。。。。100 - 羞 66-1, — 63.47 —■ *P<0.05 ■ -■■! ‘ -■ -■__ 女 ：-1 I x_RNAi 19810-1 RNAil981H RNAi 19813-1转染账2细胞实验组、,一

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3274002