CD137-CD137L信号通过溶酶体损伤影响小鼠血管平滑肌细胞自噬

发布时间：2021-07-14 01:04

　　目的探讨CD137-CD137L信号是否通过溶酶体损伤影响小鼠血管平滑肌细胞自噬。方法实验分为两部分:1.采用组织块培养法培养原代小鼠胸主动脉血管平滑肌（vascular smooth muscle cells,VSMCs）。实验分为3组:即空白对照组、混合炎症因子预刺激组（分别先后加入10ng/ml TNF-α,IL-1β,IFN-γ）、CD137-CD137L信号激动组[混合炎症因子+CD137L重组蛋白（终浓度10μg/ml）]。Western blot法检测各组VSMCs内溶酶体相关膜蛋白1（lysosomal associated membrane protein 1,LAMP1）、组织蛋白酶B（cathepsin B,CTSB）、组织蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）蛋白的表达水平。免疫荧光法检测各组VSMCs内溶酶体相关膜蛋白2（lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2）的表达水平。吖啶橙（acridine orange,AO）染色法检测各组VSMCs内溶酶体p H值变化。透射电镜观察各组VSMCs内溶酶体直径变... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1.原代小鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMCs）培养以及α-SMA免疫荧光染色（2.3.1.A：×40，2.3.1.B：×4），标尺：200μm

图 2.3.2. 不同浓度雷帕霉素对 VSMCs 自噬的影响Figure 2.3.2. Effects of different concentrations of rapamycin on autophagy in VSM2.3.3 激动 CD137-CD137L 信号对 VSMCs 中溶酶体标志蛋白的影响Western blot 显示（图 2.3.3）：混合炎症因子预刺激后，VSMCs 中 LAMCTSB、CTSD 表达水平与对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。CD137L 蛋白激动 CD137-CD137L 信号后，VSMCs 内 LAMP1、CTSB、CT达水平均明显低于对照组（分别为 0.38±0.03 比 1.08±0.06、0.33±0.04 比±0.03、0.37±0.02 比 0.90±0.02，P<0.05）。

图 2.3.3. CD137-CD137L 信号对小鼠 VSMCs 中 LAMP1、CTSB、CTSD 表达的影响（1：对照组，2：混合炎症因子预刺激组，3：CD137-CD137L 信号激活组）：与对照组相比，aP>0.05，n=3；bP<0.05，n=3Figure 2.3.3. The effect of CD137-CD137L signaling on expression of CTSB, LAMP1 andCTSD in mouse VSMCs2.3.4 激动 CD137-CD137L 信号对小鼠 VSMCs 中溶酶体 pH 的影响活细胞染色结果显示（图 2.3.4）：混合炎症因子预刺激组 VSMCs 内红色荧光斑点总数与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。CD137-CD137L 信号激动组 VSMCs 内红色荧光斑点总数少于对照组[（20.66±3.53）个/细胞比（90.33±8.19）个/细胞，P<0.05]，表明溶酶体 pH 值升高。

【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟.  中国循环杂志. 2019(03)
[2]CD137-CD137配体信号通路通过JNK途径影响小鼠血管平滑肌细胞自噬[J]. 许尧,陈蕊,丁亮,仲威,杨萍,李波,邵晨,王中群,严金川.  中华心血管病杂志. 2018 (05)
[3]CD137-CD137L信号通路通过调控小鼠血管平滑肌细胞自噬小体出胞影响动脉粥样硬化钙化形成[J]. 李波,李晓阳,仲威,邵晨,王中群,袁伟,严金川.  中华心血管病杂志. 2017 (01)



本文编号：3283086