RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌缺氧/复氧损伤中的作用

发布时间：2021-07-25 14:31

　　目的：研究1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate, S1P）后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其与PI3K/Akt和ERK1/2信号通路的关系。方法：1.大鼠H9c2细胞的缺氧/复氧模型的建立用含10%FBS的DMEM培养基培养24h后,换用预先经95%N2+5%CO2昆合气饱和的缺氧液,然后放入通有95%N2+5%CO2的37℃培养箱缺氧培养若干小时,复氧时换用无FBS的DMEM培养基,在正常培养条件下培养若干小时,MTT测定细胞存活率。选择适宜的缺氧复氧时间,建立缺氧/复氧模型。2.S1P后适应对H9c2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其（?）PI3K/Akt信号通路的关系。将培养的大鼠H9c2细胞随机分为5组,即（1）正常对照组（C组）；（2）缺氧/复氧（H/R）组；（3）S1P组；（4）S1P+LY组；（5）LY组。C组换用无血清的DMEM培养；H/R组缺氧培养16h,复氧培养4h；S1P组在复氧时加入终浓度为4μM S1P复氧培养4h；S1P+LY组在复氧时加入终浓度为10μM的LY294002（PI3K/Akt抑制剂）预处理30m... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、大鼠H9c2细胞的培养及缺氧/复氧模型的建立
    1.1 实验材料
        1.1.1 细胞
        1.1.2 实验仪器
        1.1.3 实验器材
        1.1.4 实验试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 H9c2细胞的培养
        1.2.3 实验分组及缺氧/复氧损伤模型的建立
        1.2.4 MTT法检测细胞活力
        1.2.5 统计学处理
    1.3 结果
    1.4 小结
二、S1P通过PI3K/Akt信号通路抗缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验器材
        2.1.4 药品与试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 实验分组及给药
        2.2.4 MTT法检测细胞活力
        2.2.5 细胞培养液中的MDA含量的测定
        2.2.6 细胞培养液中T-SOD及Mn-SOD活力的测定
        2.2.7 细胞内游离钙离子浓度的测定
        2.2.8 流式细胞术分析测定细胞凋亡率
        2.2.9 Western Blot检测心肌细胞p-Akt和t-Akt的蛋白表达
        2.2.10 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 细胞存活率
        2.3.2 细胞培养液中MDA含量
        2.3.3 细胞培养液中T-SOD和Mn-SOD活力
        2.3.4 细胞内游离钙离子的测定
        2.3.5 细胞凋亡率
        2.3.6 p-Akt/t-Akt的蛋白表达变化
    2.4 小结
三、S1P通过ERK1/2信号通路抗缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验器材
        3.1.4 药品与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 细胞培养
        3.2.3 实验分组及给药
        3.2.4 MTT法检测细胞活力
        3.2.5 细胞培养液中的MDA含量的测定
        3.2.6 细胞培养液中T-SOD及Mn-SOD活力的测定
        3.2.7 细胞内游离钙离子浓度的测定
        3.2.8 流式细胞术分析测定细胞凋亡率
        3.2.9 Western Blot检测心肌细胞p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表达
        3.2.10 统计学处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 细胞存活率
        3.3.2 细胞培养液中MDA含量
        3.3.3 细胞培养液中T-SOD和Mn-SOD活力
        3.3.4 细胞内游离钙离子的测定
        3.3.5 细胞凋亡率
        3.3.6 p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表达变化
    3.4 小结
讨论
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 1-磷酸鞘氨醇受体的功能与作用研究进展
    综述参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]1-磷酸鞘氨醇后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用[J]. 郑新彬,苏健,高卫真,温克.  中国现代应用药学. 2014(01)
[2]S1P对缺氧/复氧诱导的共培养心肌细胞和成肌细胞损伤的影响[J]. 于欢,谷翔,张普华,徐良贤,陈培良,秦仲君,赵勇.  华中科技大学学报(医学版). 2013(06)
[3]Effect of emulsified isoflurane on apoptosis of anoxia-reoxygenation neonatal rat cardiomyocytes[J]. Xiao Liu,Qu-Lian Guo,Zhong Zhang,Long Long,Yang Yang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(12)
[4]钙超载及其在心肌缺血/再灌注损伤中的作用机制研究现状[J]. 程永生,陈宇,李冬.  中国医学创新. 2013(03)
[5]1-磷酸鞘氨醇对过氧化氢所致微血管通透性增高的影响[J]. 张丽志,苏健,温克.  中国现代应用药学. 2013(01)
[6]MAPK信号通路研究进展[J]. 陈建勇,王聪,王娟,曹礼荣.  中国医药科学. 2011(08)
[7]巴戟天糖链对缺氧复氧损伤内皮细胞的血管形成作用研究[J]. 王宁,周鹏,冯国清,刘心玉,张培君,吴斌,胡香杰,乔鹏.  中国药理学通报. 2011(02)
[8]Effect of S1P5 on proliferation and migration of human esophageal cancer cells[J]. WeiMin Hu, Department of Microbiology and Immunology, North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China Li Li, BaoQian Jing, ChaoLi Wang, Li Feng, YongEn Xie, Institute of Immunology and Molecular Biology, North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China YongSheng Zhao, Department of Thoracic Surgery, Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(15)
[9]吗啡后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的影响[J]. 龚子曦,冉珂,常业恬,徐军美.  浙江大学学报(医学版). 2009(05)
[10]PPARγ激动剂罗格列酮对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激和凋亡的影响[J]. 姚友杰,耿登峰,王景峰,杨敏华,张玉玲,聂如琼,周淑娴.  南方医科大学学报. 2009(04)



本文编号：3302205