缺氧预处理心脏干细胞源外泌体通过自噬调控缺氧复氧诱导心肌凋亡的实验研究

发布时间：2021-07-29 21:58

　　研究背景:急性心肌梗死再灌注治疗后发生心功能不全最主要的病理生理基础是缺血再灌注损伤（Ischemia/reperfusion,I/R）过程中造成了心肌细胞的凋亡和坏死。心脏干细胞（Cardiac stem cells,CSCs）作为一种理想的种子干细胞可显著修复梗死心肌、改善心肌重构和心功能。目前的研究认为,CSC移植治疗缺血性心肌病心功能的改善主要获益于细胞的旁分泌机制,而外泌体（Exosomes）是干细胞旁分泌效应中发挥主要作用的因子。与CSC相比,作为非细胞成分的CSC源Exosomes性能稳定,不易受移植后缺血微环境的影响,可避免干细胞移植时畸胎瘤的形成、免疫反应、细胞增殖分化有限等问题,同时还提供了生长因子等细胞保护因子,能够抗凋亡、抗纤维化,促进血管生成,增强心肌分化,修复受损组织。已有研究显示,缺氧预处理（Hypoxic preconditioning,HPC）能提高干细胞修复能力,同时也增强了干细胞源Exosomes心肌保护作用。既往有关心肌I/R发病机制的研究大多是集中在氧自由基、钙超载、炎症反应、线粒体损伤、细胞凋亡、内皮细胞活化和损伤以及自噬等方面,其中自噬被认... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：127 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代CSCs培养注：A：培养第3天；B：原代细胞培养第5天；C：培养第7-8天；D：原代细胞培养第10天，细胞分布

图 2：MACS 获取 c-kit+CSCsS 后即刻（×200 倍，标尺=50μm）；B：MACS 后培养 1 天（×200 倍，标尺=5 倍，标尺=100μm）；D：MACS 后培养第 5 天（×100 倍，标尺=100μm）。 c-kit+CSCs 鉴定细胞术（FCM）鉴定 CSCs 干细胞表面标记抗原的表达测 MACS 前后 CSCs 干细胞表面标记物抗原分子 CD34、表达（图 3）。结果显示，MACS 前后 CD34 以及 CD45.05），表明获取的 CSCs 为非骨髓源性。但 MACS 前 c-kit±0.10 而 MACS 后 CSCs 干细胞标记物分子 c-kit 表达量4（5P<0.05），表明通过胶原酶消化法结合 MACS 可成功获取

图 2：MACS 获取 c-kit+CSCs注：A：MACS 后即刻（×200 倍，标尺=50μm）；B：MACS 后培养 1 天（×200 倍，标尺=50μm）；C：培养第 3 天（×100 倍，标尺=100μm）；D：MACS 后培养第 5 天（×100 倍，标尺=100μm）。2.2 大鼠 c-kit+CSCs 鉴定2.2.1 流式细胞术（FCM）鉴定 CSCs 干细胞表面标记抗原的表达FCM 检测 MACS 前后 CSCs 干细胞表面标记物抗原分子 CD34、CD45 以及c-kit 分子的表达（图 3）。结果显示，MACS 前后 CD34 以及 CD45 表达无显著差异（P>0.05），表明获取的 CSCs 为非骨髓源性。但 MACS 前 c-kit 分子的表达量为 3.52%±0.10 而 MACS 后 CSCs 干细胞标记物分子 c-kit 表达量显著增高达88.83%±3.4（5P<0.05），表明通过胶原酶消化法结合 MACS 可成功获取 c-kit+CSCs。

【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的比较[J]. 谢茂松,徐国兴,李琼,肖紫云.  国际眼科杂志. 2007(05)



本文编号：3310134