血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究
发布时间：2021-08-04 15:27
目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（Angtiotensin Ⅱ type 1 receptor associated protein,ATRAP）对体外培养的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscular cell,VSMC）凋亡的影响及相关机制;腺病毒过表达的ATRAP对颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用。从而丰富ATRAP抑制颈动脉内膜增生的作用机制,并为临床治疗颈动脉术后再狭窄提供新的治疗方向。方法:体外实验:1 VSMC的获得、培养与鉴定VSMC购自广州吉妮欧生物科技有限公司。取自大鼠胸主动脉段组织,酶消化法获得。在添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM的培养基中常规培养,在leica倒置显微镜下观察细胞生长状态、汇合度等;用α-SM-actin鉴定VSMC细胞表型。2 TUNEL检测腺病毒过表达的ATRAP对VSMC凋亡的影响2.1构建ATRAP过表达腺病毒与对照病毒由汉恒生物科技（上海）有限公司构建ATRAP的腺病毒过表达载体并提供对照腺病毒。2.2 TUNEL测定ATRAP过表达对VSMC凋亡的影响VSMC培养至5-7代,汇合度达90%,胰酶消化后...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鉴定大鼠血管平滑肌细胞??
３．１?ＶＳＭＧ的获得、培养与鉴定??倒置荧光纤维镜下可见细胞贴壁生长，单个细胞呈细长梭形，细胞生长致??密处平行排列成束，典型的“峰谷状”生长。（图１．２）用ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ染色后，通??过倒置荧光显微镜鉴定，血管平滑肌细胞呈绿色荧光。（图１．３）??图１．２光镜下大鼠ＶＳＭＣ典型的“峰谷状”生长??ｗｉｉｉ??图１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鉴定大鼠血管平滑肌细胞??３．?２腺病毒过表达ＡＴＲＡＰ促进离体的大鼠ＶＳＭＣ凋亡??２４??
３．?２．?１腺病毒转染效率??结果发现腺病毒转染ＶＳＭＣ?２４ｈ后，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ组和Ａｄｖ．ＧＦＰ组转染率达??９０％以上。（图１．４）??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ?Ａｄｖ．ＧＦＰ??图１．４腺病毒转染ＶＳＭＣ的转染效率图??３．?２．?２腺病毒转染２４ｈ后，检测ＡＴＲＡＰ蛋白表达情况，结果显示，ＡＴＲＡＰ??高表达，而且没有与ＧＦＰ形成融合蛋白。??Ａｄｖ．ＧＦＰ?Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ??ＧＦＰ?寒一??ＡＴＲＡＰ??ｇａｐｄｈ??图１．５腺病毒转染后蛋白ＡＴＲＡＰ的表达??３．?２．?３?ＴＵＮＥＬ检测腺病毒转染过表达的ＡＴＲＡＰ对离体ＶＳＭＣ凋亡的影响??为了确定ＡＴＲＡＰ参与调控ＶＳＭＣ凋亡的吋能性，我们利用ＴＵＮＥＬ法检测??ＡＴＲＡＰ过表达对体外ＶＳＭＣ凋亡的影响。腺病毒转染ＡＴＲＡＰ至培养的ＶＳＭＣ?２４??小时，更换０．１％?ＦＢＳ的高糖ＤＭＥＭ培养基继续培养２４ｈ，继而加入Ａｎｇｌｌ继续培??养２４小时后进行ＴＵＮＥＬ／ＤＡＰＩ染色发现，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ＋Ａｎｇ?ＩＩ?相比Ａｄｖ．ＧＦＰ＋Ａｎｇ??ＩＩ?组，ＶＳＭＣ凋亡率显著增加（１１．５０?±１．６６％?ｖｓ?１．１３?±０．２７％，尸?＜０．０５），??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ组朴丨比Ａｄｖ．ＧＦＰ组，ＶＳＭＣ凋亡率显著增加（１３．１７±０．４８％ｖｓ?１．２０土??２５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]INHIBITORY EFFECT OF ANGIOTENSIN II TYPE 1 RECEPTOR-ASSOCIATED PROTEIN ON VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELL GROWTH AND NEOINTIMAL FORMATION[J]. Zhen Li1,2, Zhong-gao Wang1,3, Xiu Chen1, and Xiao-dong Chen21Department of Vascular Surgery, the Second Artillery General Hospital, Beijing 1000882Department of General Lab and Vascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 5240013Department of Surgery, Vascular Institute and Xuanwu Hospital, Capital University ofMedical Sciences, Beijing 100053. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(01)
[2]血管紧张素-（1-7）对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1/2的抑制作用[J]. 钟健,祝之明,杨永健. 生理学报. 2001(05)
本文编号：3321947
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鉴定大鼠血管平滑肌细胞??
３．１?ＶＳＭＧ的获得、培养与鉴定??倒置荧光纤维镜下可见细胞贴壁生长，单个细胞呈细长梭形，细胞生长致??密处平行排列成束，典型的“峰谷状”生长。（图１．２）用ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ染色后，通??过倒置荧光显微镜鉴定，血管平滑肌细胞呈绿色荧光。（图１．３）??图１．２光镜下大鼠ＶＳＭＣ典型的“峰谷状”生长??ｗｉｉｉ??图１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鉴定大鼠血管平滑肌细胞??３．?２腺病毒过表达ＡＴＲＡＰ促进离体的大鼠ＶＳＭＣ凋亡??２４??
３．?２．?１腺病毒转染效率??结果发现腺病毒转染ＶＳＭＣ?２４ｈ后，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ组和Ａｄｖ．ＧＦＰ组转染率达??９０％以上。（图１．４）??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ?Ａｄｖ．ＧＦＰ??图１．４腺病毒转染ＶＳＭＣ的转染效率图??３．?２．?２腺病毒转染２４ｈ后，检测ＡＴＲＡＰ蛋白表达情况，结果显示，ＡＴＲＡＰ??高表达，而且没有与ＧＦＰ形成融合蛋白。??Ａｄｖ．ＧＦＰ?Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ??ＧＦＰ?寒一??ＡＴＲＡＰ??ｇａｐｄｈ??图１．５腺病毒转染后蛋白ＡＴＲＡＰ的表达??３．?２．?３?ＴＵＮＥＬ检测腺病毒转染过表达的ＡＴＲＡＰ对离体ＶＳＭＣ凋亡的影响??为了确定ＡＴＲＡＰ参与调控ＶＳＭＣ凋亡的吋能性，我们利用ＴＵＮＥＬ法检测??ＡＴＲＡＰ过表达对体外ＶＳＭＣ凋亡的影响。腺病毒转染ＡＴＲＡＰ至培养的ＶＳＭＣ?２４??小时，更换０．１％?ＦＢＳ的高糖ＤＭＥＭ培养基继续培养２４ｈ，继而加入Ａｎｇｌｌ继续培??养２４小时后进行ＴＵＮＥＬ／ＤＡＰＩ染色发现，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ＋Ａｎｇ?ＩＩ?相比Ａｄｖ．ＧＦＰ＋Ａｎｇ??ＩＩ?组，ＶＳＭＣ凋亡率显著增加（１１．５０?±１．６６％?ｖｓ?１．１３?±０．２７％，尸?＜０．０５），??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ组朴丨比Ａｄｖ．ＧＦＰ组，ＶＳＭＣ凋亡率显著增加（１３．１７±０．４８％ｖｓ?１．２０土??２５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]INHIBITORY EFFECT OF ANGIOTENSIN II TYPE 1 RECEPTOR-ASSOCIATED PROTEIN ON VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELL GROWTH AND NEOINTIMAL FORMATION[J]. Zhen Li1,2, Zhong-gao Wang1,3, Xiu Chen1, and Xiao-dong Chen21Department of Vascular Surgery, the Second Artillery General Hospital, Beijing 1000882Department of General Lab and Vascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 5240013Department of Surgery, Vascular Institute and Xuanwu Hospital, Capital University ofMedical Sciences, Beijing 100053. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(01)
[2]血管紧张素-（1-7）对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1/2的抑制作用[J]. 钟健,祝之明,杨永健. 生理学报. 2001(05)
本文编号：3321947
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/3321947.html
最近更新
教材专著
