内脏脂肪素通过氧化低密度脂蛋白受体1介导血管内皮细胞炎症反应及坏死性凋亡的研究

发布时间：2021-08-04 11:09

　　本研究旨在探索脂肪细胞因子内脏脂肪素（Visfatin）能否诱导血管内皮细胞（VEC）发生炎症及坏死性凋亡（Necroptosis）,并初步探讨其机制。体外分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,单独使用Visfatin刺激或在阻断氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）后给予Visfatin刺激,采用Western blot、RT-PCR、免疫细胞化学法、酶联免疫吸附法（ELISA）、MTT、流式细胞化学法等观察细胞炎症及Necroptosis的发生情况。结果显示,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可诱导HUVECs中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和LOX-1的mRNA及蛋白水平表达显著上调;而LOX-1抑制剂聚肌苷酸预处理可明显降低Visfatin诱导的MCP-1表达。另外,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可明显诱导HUVECs中出现坏死样特征,且Necroptosis特异性基因BMF的mRNA表达显著增加,细胞增殖率降低;而聚肌苷酸预处理后,细胞增殖率升高,BMF的基因表达下调。实验结果提示,Visfatin通过LOX-1介导,引起了血管内皮细胞炎... 

【文章来源】：生物医学工程学杂志. 2020,37(05)北大核心EICSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

Visfatin刺激诱导HUVECs中LOX-1的表达a.分离培养的HUVECs，图中标尺=100μm;b-c.LOX-1的基因（b）和蛋白（c）表达；d.免疫细胞化学法检测HUVECs中LOX-1的蛋白表达。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3

为深入探究Visfatin对细胞发生Necroptosis和凋亡的影响及其可能机制，我们应用RT-PCR方法对Visfatin、AngⅡ以及Leptin干预后细胞中Necroptosis特异性基因BMF[16]和凋亡特异性基因Caspase3的基因表达进行检测。如图4所示，与对照组相比，Visfatin可明显上调HUVECs细胞中BMF的m RNA表达（P<0.05），但对凋亡特异性基因Caspase3表达则无明显的上调作用。而AngⅡ、Leptin 16μg/m L组可以显著上调Caspase3的基因表达（P<0.05）。此外，流式细胞化学法检测结果也显示，Visfatin刺激组中细胞并无明显凋亡峰，AngⅡ刺激组中出现了明显的凋亡峰（见表2）。说明此浓度的Visfatin可诱导细胞发生Necroptosis，而非凋亡。图3 Visfatin对HUVECs超微结构变化的影响（图中标尺=100 nm)

图2 Visfatin通过LOX-1促进HUVECs中炎症因子MCP-1的表达a和c.MCP-1的基因（a）和蛋白（c）表达；b.ELISA法检测HUVECs分泌MCP-1蛋白的变化。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3进一步实验中我们发现，加用LOX-1特异性抑制剂Polyinosinic acid或Necroptosis特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1）后，与单纯Visfatin刺激组相比，BMF的基因表达水平显著降低，而Caspase3的表达却出现明显增加（P<0.05）（见图4）。流式细胞化学法结果显示，Polyinosinic acid+visfatin组中，凋亡峰较Visfatin单独刺激组明显（见表2）。以上结果说明，LOX-1参与介导Visfatin诱导HUVECs发生Necroptosis。


本文编号：3321584