Fut8对巨噬源性泡沫细胞运动迁移能力的影响及机制探讨

发布时间：2021-08-10 15:02

　　动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种主要累及大、中动脉的慢性炎症性疾病,以大量脂质堆积在内膜下为特征。渗透到内膜下的巨噬细胞吞噬脂质转变为泡沫细胞后其运动能力显著降低,进而囤积在内膜下导致粥样斑块和脂质坏死核心形成。蛋白质的糖基化修饰对蛋白的折叠、稳定和功能具有重要影响。那么泡沫细胞运动能力减弱导致其滞留斑块内是否与关键蛋白糖基化修饰水平改变存在关联?本文利用溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）诱导Raw264.7巨噬细胞和小鼠原代腹膜巨噬细胞形成泡沫细胞为模型,观察泡沫细胞运动能力的改变。进一步通过流式细胞术、免疫荧光和WB等技术检测泡沫细胞形成前后蛋白糖基化修饰水平和糖基转移酶的变化;通过双荧光素酶报告实验、EMSA和Chip等实验探讨糖基转移酶改变的的分子调控机制。研究结果显示:（1）200μM的LPA作用24 h能够促进巨噬源性泡沫细胞的形成;（2）巨噬源性泡沫细胞运动能力的下降与岩藻糖基转移酶8（fucosyltransferase 8,Fut8）表达量的下降呈正相关;（3）动物实验结果显示动脉粥样硬化斑块的消退过程伴随着斑块... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

LPA对Raw264.7巨噬细胞存活率的影响（*p<0.05）

重庆医科大学博士研究生学位论文vitality (*p＜0.05). A: Effects of different concentrations of LPA on cell vitality; B: Effects ofdifferent time of LPA on cell vitality.2.2 LPA 对 Raw264.7 巨噬细胞内脂滴含量的影响油红 O 属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，能与甘油三酯结合呈小脂滴状[24]。为了探讨 LPA 能否促进 Raw264.7 巨噬细胞向泡沫细胞的转化，我们利用油红 O 染色实验检测细胞内的脂质囤积情况。油红 O 染色结果显示 LPA 作用Raw264.7 巨噬细胞 24 h 后，随着给药浓度的增加细胞内脂滴明显增多 （图 2A）。200 μM 的 LPA 处理时，随着给药时间的延长，细胞内脂滴含量越来越多（图 2B）。

重庆医科大学博士研究生学位论文主要组分。细胞内胆固醇过度聚集与动脉粥样硬化泡沫细胞形成密切相关[25]。因此我们检测了 LPA 处理后，Raw264.7 巨噬细胞内的胆固醇酯比例。结果显示 LPA作用 Raw264.7 巨噬细胞 24 h后，浓度为 100 μM 时细胞内胆固醇酯比例开始大于50%（图 3A）。200 μM 的 LPA 处理时，随着给药时间的延长，24 h 细胞内胆固醇酯比例大于 50%（图 3B）。根据以上结果证实 200 μM 的 LPA 作用 24 h 显著促进了 Raw264.7 巨噬细胞向泡沫细胞转化。

【参考文献】：
期刊论文
[1]瑞舒伐他汀减轻ApoE-/-小鼠动脉硬化形成与ST6Gal-Ⅰ表达相关性研究[J]. 刘燕,张军,蒲强红,邓潇,于超.  中国药理学通报. 2016(04)



本文编号：3334279